Name: tissue determination using the animal cap transplant (act) assay in xenopus laevis
Uploaded: 2010-05-16T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis at JoVE.com

이 작품은 실명 (경력 개발 MEZ 및 ASV로 수상 및 안과의학과에 제한 부여), E. 마틸다 지글러 재단 (MEZ 및 ASV)와 국립 안과 연구소 / NIH (MEZ 방지 연구의 교부금에 의해 지원되었다 , 보조금 R01EY015748 및 R01EY017964).

부 I.는 ACT 분석을위한 셋업 <ol><li> 클로로포름 정화 방법 (; 응용 Biosystems / 앰비온, 오스틴, TX 예 mMessage mMachine 키트) : 자신의 페놀을 사용하는 것과 제조 업체에 의해 제안 주사 뒤덮인 RNA를 생성합니다. 형광 단백질을 인코딩 RNA는 추적으로 사용됩니다. 우리도 노란색 형광 단백질 (YFP) 또는 pCS2 + 발현 벡터에 cDNA mCherry 5, 고쳐 쓰다. </li><li> micropipette의 풀러를 사용하는 테이퍼 유리 도움...

<ol>
	<li>Smith, W. C., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+cloning+of+noggin,+a+new+dorsalizing+factor+localized+to+the+Spemann+organizer+in+Xenopus+embryos.">Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor localized to the Spemann organizer in Xenopus embryos.</a> Cell. 70, 829-840 (1992).</li><li>Lamb, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+induction+by+the+secreted+polypeptide+noggin.">Neural induction by the secreted polypeptide noggin.</a> Science. 262, 713-718 (1993).</li><li>Green, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Methods+in+Developmental+Biology:+Xenopus+&#38;+Zebrafish.">Molecular Methods in Developmental Biology: Xenopus &#38; Zebrafish.</a> Methods in Developmental Biology. , (1999).</li><li>Viczian, A. S., Solessio, E. C., Lyou, Y., Zuber, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+functional+eyes+from+pluripotent+cells.">Generation of functional eyes from pluripotent cells.</a> PLoS Biol. 7, e1000174-e1000174 (2009).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nat Methods. 2, 905-909 (2005).</li><li>Brown, A. L., Johnson, B. E., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+patch-pipettes+and+sharp+electrodes+with+a+programmable+puller.">Making patch-pipettes and sharp electrodes with a programmable puller.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Lan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noggin+Elicits+Retinal+Fate+in+Xenopus+Animal+Cap+Embryonic+Stem+Cells.">Noggin Elicits Retinal Fate in Xenopus Animal Cap Embryonic Stem Cells.</a> Stem Cells. , (2009).</li></ol>

이 비디오에서는, 우리는 동물 캡 이식 분석을 만들 재배열 Xenopus의 생물학 자에 의해 사용 고전 기법, 우리의 버전을 증명하고있다. 상온에서, Xenopus의 배아는 단계 9 15 매우 신속하게 개발할 수 있습니다. 14에 그들을 배치함으로써 ° C, 배아의 발달 속도가 느려졌되고 더 많은 이식 한 실험에서 수행할 수 있습니다. 이 세 단계 (&gt; 43분의 42)에 배아를 성장하기 위해 필요한 경우, 우?...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>mMessage mMachine SP6 Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Applied Biosystems/Ambion</td>
<td>AM1340</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Borosilicate Capillary Tubes (1.0mm OD x 0.5mm ID)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FHC, Inc</td>
<td>27-30-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sutter Micropipette Puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments, Inc.</td>
<td>P-97</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gentamicin sulfate [50 mg/ml]</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>BW17-528Z</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard/elastomer Kit 1.1lb</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>NC9644388</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>60 x 15 mm polystyrene petri dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USA Scientific</td>
<td>8609-0160</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>human chorionic gonadotropin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Intervet</td>
<td>22219</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pico-Injector Microinjection Systems</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>650003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Torrey Pines Scientific ECHOtherm Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>11-680-21</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Transfer pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Krackeler</td>
<td>6290-20635A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumostar #5 Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>11295-10</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

tissue determination using the animal cap transplant (act) assay in xenopus laevis

많은 단백질은 배아 발달의 이중 역할을한다. 특정 조직의 세포 운명 결정을 규제 이들은 또한 배아의 큰 지역의 발전에 영향을 줄 수 있습니다. 이것은 분석하기 어려운 특정 조직에서의 역할을 정의합니다. 예를 들어,<em&gt; 소량</em&gt;의 overexpression<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; 태아의 눈을 포함 전체 앞쪽에 영역의 확장을 원인<sup&gt; 1,2</sup&gt;. 이 결과로부터, 그것은 노긴은 신경 조직의 확장을 일으키는하여 눈의 결정 또는에 직접적인 역할을 수행하는 경우, 노긴는 간접적으로 안구 형성에 영향을 알 수 없습니다. 이 복잡​​한 표현형를 갖는 것은 분석 세포 운명 결정에의 눈을 특정 역할이 어려운 공부합니다. 우리는이 문제를 극복 분석을 개발했습니다. 의 pluripotent 자연을 활용<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; 동물 모자<sup&gt; 3</sup&gt; 우리는 같은 유전자 산물의 기능 (들)을 테스트하는 시험을 개발했습니다<em&gt; 소량</em&gt; 또는 눈 필드 전사 요인 (EFTFs)은 배 (胚)의 측면에이 조직을 이식하여 특정 조직이나 세포 종류로 모자를 변환하기<sup&gt; 4</sup&gt;. 우리가 노긴 단백질 치료 또는 전사 요소의 컬렉션 중 하나가 동물 대문자로 망막 세포의 운명을 결정할 수 찾았지만,이 절차는뿐만 아니라 다른 조직을 지정에 관련된 유전자 산물 (들)을 식별하는 데 사용될 수 있습니다.

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Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

동물 모자 overexpressing 유전자 제품 (들)은 개발의 측면에 이식 아르<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; 배아는 순서대로 조직이 결정 여부를 설정합니다.

에있는 동물 캡 이식 (ACT) 어세를 사용하여 조직 결정 Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Research

JoVE Journal

Biology

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Dissection of Organizer and Animal Pole Explants from Xenopus laevis Embryos and Assembly of a Cell Adhesion Assay

주최자 및 동물 폴 Explants Xenopus laevis의 태아로부터 세포 접착 분석의 총회의 해부

연구

생물학

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

플라스틱 삽입 및 Xenopus laevis의 태아의 Sectioning

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Xenopus laevis 여성의 난자를 구하기

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Xenopus laevis 에그의 작성과 분류는 압축을 풉니다

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Xenopus Laevis의 Oocytes의 Microinjection

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Mammary Epithelial Transplant Procedure

내유 상피 이식 절차

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

라이브 셀 이미징 및 배아 상피 세포의 정량 분석 Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Production of Transgenic Xenopus laevis by Restriction Enzyme Mediated Integration and Nuclear Transplantation

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트렌스 제닉 생산 Xenopus laevis 제한 효소 중재 통합 및 핵 이식에 의해

Stable integration of cloned gene products into the Xenopus genome is necessary to control the time and place of expression, to express genes at later ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

의 얼굴 이식<em&gt;는 Xenopus laevis의</em&gt; 태아

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

의 해부<em&gt;는 Xenopus laevis의</em&gt; 신경 크레스트<em&gt; 시험관</em&gt; 이식편 문화 또는<em&gt; 생체</em&gt; 이식

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...