Name: live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis
Uploaded: 2010-05-23T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door een National Institutes of Health (R01-HD044750), een carrière subsidie ​​van de National Science Foundation, en ondersteuning van de American Heart Association (Begin Grant-in-Aid). De auteurs danken Davidson Lab leden: HY Kim, M. von Dassow en J. Zhou (voor hulp met dagelijkse verantwoordelijkheden lab), en Lin Zhang voor haar hulp in de moleculaire biologie en synthetiseren van mRNA. Wij erkennen experimentele inspanningen van alle de kikker labo&#39;s (met name Ray Keller en Doug DeSimone&#39;s), die hebben bijgedragen aan een deel van dit protocol, door het ontwikkelen en testen van verschillende methoden door de jaren heen. Wij danken Richard Harland en John Wallingford voor hun vriendelijke gaven van mem-GFP en Moesin-GFP plasmiden respectievelijk.

Voordat u begint <ol class="lalpha"><li> Synthetiseren afgedekt mRNA van gelineariseerde DNA template dat codeert voor het eiwit fluorescent gelabelde en te zuiveren mRNA door standaard werkwijzen (AmpliCap transcriptie kit; Epicentre Biotechnologie, Madison WI). mRNA hoeveelheden verdeeld moet worden voor een enkele keer gebruik in 0,2 ml centrifugebuis en opgeslagen bij -80 ° C. </li><li> Standaardmethoden om eieren te verkrijgen, in-vitrofertilisatie, en verwijdering van het ei vacht zijn eerder twee...

<ol>
	<li>Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+coating+controls+mesenchymal+shape+change+through+tissue-positioning+effects+and+reduction+of+surface-minimizing+tension.">Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension.</a> Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).</li><li>Kay, B. K., Peng, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).</li><li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females.">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cohen, S., Au, S., Pante, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes.">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).</li><li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis.">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).</li><li>Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+control+of+excitable+embryonic+tissues:+three+stimuli+induce+rapid+epithelial+contraction.">Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction.</a> Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).</li></ol>

We hebben gepresenteerd experimentele protocollen regelmatig gebruikt in ons lab om de afbeelding dynamisch veranderende cytoskelet in de apicale cel cortex en oscillerende celmembranen van epitheelcellen in Xenopus embryo&#39;s. Men moet gebruiken deze protocollen als uitgangspunt voor live-imaging van epitheliale cellen vormen, optimalisatie van dit protocol is essentieel en een deel van de instellingen veranderen, afhankelijk van het type microscoop systeem een ​​heeft en de aard van de eiwitten die men ...

live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis

Embryonale epitheliale cellen dienen als een ideaal model om de morfogenese bestuderen waar multi-cellulaire weefsels ondergaan veranderingen in hun geometrie, zoals veranderingen in de cel-cel-oppervlakte en hoogte, en waar cellen ondergaan mitose en migreren. Bovendien kan epitheliale cellen ook reguleren morfogenetische bewegingen in de aangrenzende weefsels<sup&gt; 1</sup&gt;. Een traditionele methode om epitheliale cellen en weefsels te bestuderen betrekken chemische fixatie en histologische methoden om celmorfologie of lokalisatie van bepaalde eiwitten van belang vast te stellen. Deze benaderingen nog steeds nuttig en &quot;snapshots&quot; van de cel vormen en weefsels architectuur te bieden, echter, er nog veel worden begrepen over hoe cellen te verkrijgen specifieke vormen, hoe de verschillende eiwitten te verplaatsen of te lokaliseren op specifieke posities, en welke paden cellen te volgen in de richting van hun laatste gedifferentieerde lot. Hoge resolutie live-imaging aanvulling op de traditionele methoden en maakt het ook mogelijk meer direct onderzoek naar de dynamische cellulaire processen betrokken bij de vorming, het onderhoud en morfogenese van meercellige epitheliale vellen. Hier laten we zien experimentele methodes uit het isolement van dierlijk cap weefsels van<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryo&#39;s met confocale beeldvorming van epitheliale cellen en eenvoudige meting benaderingen die elkaar kunnen aanvullen moleculaire en cellulaire studies van epitheliale morfogenese.

Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis at JoVE.com

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus embryonale epitheel is een ideaal modelsysteem om cel gedrag, zoals polariteit ontwikkeling en vorm veranderen tijdens epitheliale morfogenese bestuderen. Traditionele histologie van vaste monsters wordt in toenemende mate aangevuld door live-cell imaging confocale. Hier laten we zien methoden om de kikker weefsel te isoleren en te visualiseren live-epitheliale cellen en hun cytoskelet met behulp van live-cell confocale microscopie.

Live-cell imaging en kwantitatieve analyse van de embryonale epitheelcellen in Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

Plastic Inbedding en snijden van Xenopus laevis embryo&#39;s

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Het verkrijgen van Eieren van Xenopus laevis Teven

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Voorbereiding en Fractionering van Xenopus laevis Egg Extracten

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Micro-injectie van de Xenopus laevis Eicellen

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Weefsel Bepaling Met behulp van de Animal Cap Transplantatie (ACT) Assay in Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kwantitatieve Live Cell Fluorescentie-microscopie analyse van Fission Yeast

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Snelle Genetische analyse van epitheliale-mesenchymale signalering tijdens haar regeneratie

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Inductie en analyse van epitheliale naar mesenchymale transitie

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplantaties in<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryo&#39;s

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

Profilering Individuele menselijke embryonale stamcellen door kwantitatieve RT-PCR

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...