Name: live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis
Uploaded: 2010-05-23T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis at JoVE.com

Diese Arbeit wurde von der National Institutes of Health (R01-HD044750), ein Career-Stipendium der National Science Foundation und unterstützt von der American Heart Association (Beginning Grant-in-Aid) unterstützt. Die Autoren danken Davidson Lab Mitglieder: HY Kim, M. von Dassow und J. Zhou (für Hilfe bei den täglichen Aufgaben lab) und Lin Zhang für ihre Unterstützung in der Molekularbiologie und der Synthese von mRNA. Wir erkennen an experimentellen Anstrengungen aller Frosch Labors (insbesondere Ray Keller und Doug DeSimone ist), die bis zu einem gewissen Teil dieses Protokolls beigetragen haben, durch die Entwicklung und Erprobung verschiedener Methoden im Laufe der Jahre. Wir danken Richard Harland und John Wallingford für die freundliche Gaben der MEM-gfp und Moesin-gfp Plasmide jeweils.

Bevor Sie beginnen <ol class="lalpha"><li> Synthesize capped mRNA von linearisierten DNA-Template-Kodierung der fluoreszenzmarkierten Protein und reinigen mRNA durch Standardverfahren (AmpliCap Transcription Kit, Epicentre Biotechnologies, Madison WI). mRNA sollte einziges Mal Gebrauch in 0,2 ml Röhrchen aliquotiert und bei -80 ° C. </li><li> Standard-Methoden, um Eier zu erhalten, in-vitro-Fertilisation, und die Entfernung des Eimantel wurden bisher 2 beschrieben. Ein Verfahren, um Eier aus eine...

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	<li>Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+coating+controls+mesenchymal+shape+change+through+tissue-positioning+effects+and+reduction+of+surface-minimizing+tension.">Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension.</a> Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).</li><li>Kay, B. K., Peng, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).</li><li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females.">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cohen, S., Au, S., Pante, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes.">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).</li><li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis.">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).</li><li>Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+control+of+excitable+embryonic+tissues:+three+stimuli+induce+rapid+epithelial+contraction.">Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction.</a> Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).</li></ol>

Wir haben experimentelle Protokolle regelmäßig in unserem Labor zu Bild dynamisch verändernden Zytoskeletts in der apikalen Zell-Kortex und oszillierenden Zellmembranen von Epithelzellen in Xenopus Embryonen verwendet präsentiert. Man sollte diese Protokolle als Ausgangspunkt für die Live-Darstellung von Epithelzellen Formen verwenden; Optimierung dieses Protokoll ist wichtig, und einige der Einstellungen ändern, abhängig von der Art des Mikroskop-System man hat und die Art der Proteine ​​ist man in ...

live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis

Embryonale Epithelzellen dienen als ideales Modell, um Morphogenese Studie, in der multi-Zellgewebe Veränderungen in ihrer Geometrie, wie Veränderungen in der Zelle Oberfläche und Zellenhöhe unterziehen, und wo Zellen durchlaufen Mitose und Migration. Darüber hinaus können Epithelzellen regulieren auch morphogenetischen Bewegungen in benachbarte Gewebe<sup&gt; 1</sup&gt;. Eine traditionelle Methode zur epithelialen Zellen und Geweben Studie beinhalten chemische Fixierung und histologische Methoden, um Zellmorphologie oder Lokalisierung bestimmter Proteine ​​von Interesse zu bestimmen. Diese Ansätze weiterhin nützlich zu sein und bieten &quot;Schnappschüsse&quot; von Zellformen und Gewebe-Architektur, aber es bleibt noch viel zu überlegen, wie Zellen erwerben spezifische Formen, wie verschiedene Proteine ​​oder verschieben zu lokalisieren, um bestimmte Positionen, und welche Wege Zellen zu ihrer endgültigen folgen verstanden werden differenzierte Schicksal. Hochauflösende Live-Bildgebung ergänzt herkömmliche Methoden und erlaubt auch mehr direkte Untersuchung der Dynamik zellulärer Prozesse bei der Bildung, Wartung und Morphogenese vielzelliger epithelialen Blatt beteiligt. Hier zeigen wir experimentelle Methoden aus der Isolation des Tieres Kappe Gewebe aus<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryonen konfokale Bildgebung von Epithelzellen und einfache Messung Ansätze, die zusammen molekularen und zellulären Studien der epithelialen Morphogenese erweitern können.

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Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus embryonalen Epithelien sind ein ideales Modellsystem, um die Zelle Verhaltensweisen wie Polarität Entwicklung und Formänderung beim epithelialen Morphogenese zu studieren. Traditionelle Histologie des festen Proben wird zunehmend durch Live-Cell-konfokale Bildgebung ergänzt. Hier zeigen wir Methoden, um Frosch Gewebe zu isolieren und zu visualisieren leben Epithelzellen und deren Zytoskelett mit Live-cell konfokalen Mikroskopie.

Live-Cell-Imaging und Quantitative Analyse der embryonalen Epithelzellen in Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

Plastic Embedding und Schnitte von Xenopus laevis Embryonen

Forschung

Biologie

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Beziehen Eier von Xenopus laevis Weibchen

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Vorbereitung und Fraktionierung von Xenopus laevis Egg Auszüge

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Mikroinjektion von Xenopus laevis Oozyten

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Tissue Bestimmung mit dem Tier Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Quantitative Live Cell Fluoreszenz-Mikroskopie Analyse von Fission Yeast

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Schnelle Genetische Analyse von epithelial-mesenchymale Signaling Während Haarregeneration

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induktion und Analyse von epithelialen zu mesenchymalen Transition

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Gesichtstransplantation in<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryonen

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

Profiling Individuelle humanen embryonalen Stammzellen durch quantitative RT-PCR

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...