Name: live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis
Uploaded: 2010-05-23T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מכוני הבריאות הלאומיים (R01-HD044750), מענק הקריירה מן הקרן הלאומית למדע, ותמיכה של איגוד הלב האמריקני (החל גרנט-in-Aid). המחברים מודים דוידסון חברי המעבדה: HY קים, מ &#39;פון Dassow וג&#39; ג&#39;ואו (לעזרה עם אחריות מעבדה יומי), ואת לין זאנג לסיוע שלה בביולוגיה מולקולרית mRNA סינתזה. אנו מכירים מאמצים ניסויית מכל המעבדות צפרדע (בעיקר ריי קלר של ודאג של DeSimone) שתרמו חלק של פרוטוקול זה, על ידי פיתוח ובדיקה של שיטות שונות לאורך השנים. אנו מודים ריצ&#39;רד הרלנד וג&#39;ון שוולינגפורד מתנות מהסוג שלהם מ-GFP ו-GFP moesin פלסמידים בהתאמה.

לפני שתתחיל <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסנתז mRNA כתרים מתבנית DNA המקודד את החלבון לינארית מתויג fluorescently ו-mRNA לטהר על ידי שיטות סטנדרטיות (ערכת AmpliCap תמלול; ביוטכנולוגיות Epicentre, Madison WI). mRNA צריך להיות aliquoted לשימוש פעם אחת ב 0.2 צינורות צנטריפוג?...

<ol>
	<li>Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+coating+controls+mesenchymal+shape+change+through+tissue-positioning+effects+and+reduction+of+surface-minimizing+tension.">Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension.</a> Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).</li><li>Kay, B. K., Peng, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).</li><li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females.">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cohen, S., Au, S., Pante, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes.">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).</li><li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis.">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).</li><li>Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+control+of+excitable+embryonic+tissues:+three+stimuli+induce+rapid+epithelial+contraction.">Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction.</a> Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).</li></ol>

הצגנו פרוטוקולי הניסוי השתמשו בקביעות במעבדה שלנו cytoskeleton תמונה דינמית משתנה בקליפת התא apical ו נדנוד קרום התא של תאים אפיתל בעוברים Xenopus. אחד צריך להשתמש הפרוטוקולים הללו כנקודת פתיחה עבור הדמיה חיה של צורות תא אפיתל, אופטימיזציה של פרוטוקול זה הוא חיוני וחלק ההג?...

live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis

תאים אפיתל עובריים לשמש מודל אידיאלי ללמוד המורפוגנזה שבו רב הסלולר רקמות עוברים שינויים בגיאומטריה שלהם, כגון שינויים באזור תא השטח גובה התא, שבו התאים עוברים מיטוזה ו לנדוד. יתר על כן, בתאי אפיתל יכול גם לווסת את תנועות המוךפו&quot;גנטי שהולך ברקמות סמוכות<sup&gt; 1</sup&gt;. השיטה המסורתית ללמוד בתאי אפיתל ורקמות לערב קיבעון כימיים שיטות היסטולוגית כדי לקבוע מורפולוגיה התא או לוקליזציה של חלבונים מסוימים של עניין. גישות אלה ממשיכים להיות שימושי לספק &quot;תמונות&quot; של צורות ואדריכלות תא רקמה, לעומת זאת, הרבה נשאר להיות מובן על כמה תאים לרכוש צורות מסוימות, איך חלבונים שונים להעביר או בתרגום לתפקידים ספציפיים, ומה תאים נתיבים לעקוב כלפי הסופי שלהם הבדיל הגורל. רזולוציה גבוהה לחיות הדמיה משלים בשיטות מסורתיות וגם מאפשר חקירה ישיר יותר אל תוך תהליכים תאיים דינמיים מעורבים היווצרות, המורפוגנזה תחזוקה, יריעות אפיתל תאיים. כאן אנו מדגימים שיטות ניסיוניות מהבידוד של רקמות כובע חיה מ<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; עוברים ל הדמיה confocal של תאים אפיתל וגישות מדידה פשוטה יחד יכולים להגדיל מחקרים מולקולריים הסלולר של המורפוגנזה אפיתל.

Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis at JoVE.com

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus עובריים epithelia הם מערכת מודל אידיאלי ללמוד התנהגויות התא כגון פיתוח הקוטביות ולשנות צורה במהלך המורפוגנזה אפיתל. היסטולוגיה מסורתית של דגימות קבוע ויותר כהשלמה הדמיה לחיות תאים confocal. כאן אנו מדגימים שיטות לבודד ברקמות הצפרדע לדמיין לתאי האפיתל לחיות לחיות cytoskeleton שלהם באמצעות תאים מיקרוסקופיה confocal.

Live-תא הדמיה וניתוח כמותי של תאים אפיתל עובריים ב Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

פלסטיק הטבעת ואת חתך של עוברים Xenopus laevis

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

קבלת ביצים Xenopus laevis נקבות

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

הכנה ההיפוך חלוקה של Xenopus laevis ביצה תמציות

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Microinjection של ביציות Xenopus Laevis

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

רקמות קביעת שווי שימוש בבעלי חיים להשתלות (ACT) Assay ב Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

כמותי תא חי פלואורסצנטי, מיקרוסקופ ניתוח של שמרים ביקוע

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

ניתוח גנטי מהיר של איתות אפיתל-mesenchymal במהלך התחדשות שיער

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

השתלת פנים ב<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; עוברים

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

אפיון תאי גזע עוברי האנושי על ידי הפרט כמותי RT-PCR

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...