Name: live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis
Uploaded: 2010-05-23T17:00:00
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この作品は、国立衛生研究所（R01 - HD044750）、国立科学財団からのキャリアグラント、および米国心臓協会（補助金の開始）からの支援によって支えられている。分子生物学および合成mRNAの彼女の援助のためにHY金、M.フォンDassowとJ.周（毎日研究室の責任のヘルプのための）、および林張：著者は、Davidsonのラボのメンバーに感謝。我々は、長年にわたって様々な方法を開発し、テストすることにより、このプロトコルの一部に寄与しているすべてのカエルラボ（特にレイケラーのとダグDeSimoneさん）から実験的な努力を認めます。我々は、それぞれMEM - GFPとモエシン- GFPプラスミドのその親切なギフトのためにリチャードハーランドとジョンウォリングフォードに感謝。

作業を始める前に<ol class="lalpha"><li>標準的な方法（; EPICENTREのバイオテクノロジー、マディソンWI AmpliCap転写キット）による蛍光標識タンパク質の精製mRNAをエンコードする直鎖状DNAテンプレートからキャップmRNAを合成する。 mRNAは、0.2 mlの遠心チューブで単一時間の使用のために分注し、-80℃で保存してください。 </li><li> 体外受精、そして卵のコートの除去に 、卵を得るため?...

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	<li>Ninomiya, H., Winklbauer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+coating+controls+mesenchymal+shape+change+through+tissue-positioning+effects+and+reduction+of+surface-minimizing+tension.">Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension.</a> Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).</li><li>Kay, B. K., Peng, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).</li><li>Cross, M. K., Powers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obtaining+eggs+from+Xenopus+laevis+females.">Obtaining eggs from Xenopus laevis females.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cohen, S., Au, S., Pante, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes.">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).</li><li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis.">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).</li><li>Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+control+of+excitable+embryonic+tissues:+three+stimuli+induce+rapid+epithelial+contraction.">Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction.</a> Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).</li></ol>

我々は、頂端細胞の皮質とアフリカツメガエル胚における上皮細胞の細胞膜を振動さで画像を動的に変化する細胞骨格に私たちの研究室で定期的に使用される実験的なプロトコルを提示している。一つは、上皮細胞の形状のライブイメージングのための出発点として、これらのプロトコルを使用する必要がありますが、このプロトコルの最適化が不可欠であるとの設定のいくつかは1つ...

live-cell imaging and quantitative analysis of embryonic epithelial cells in xenopus laevis

胚上皮細胞は多細胞組織がそのような細胞表面の面積とセルの高さの変化など、その形状の変化を、受ける場所形態形成を研究する理想的なモデルとして機能し、細​​胞が有糸分裂を経て、移行先。さらに、上皮細胞は、隣接する組織に形態形成の動きを規制することができます<sup&gt; 1</sup&gt;。上皮細胞や組織を研究する従来の方法は、化学固定し、細胞形態や関心のある特定のタンパク質の局在を決定するために組織学的方法を含む。これらのアプローチは有用であると、セルの形状と組織のアーキテクチャの&quot;スナップショット&quot;を提供し続ける、しかし、多くの様々なタンパク質が移動したり、ローカライズ特定の位置に、そしてどのような経路の細胞はそれらの最終的な方向に続くか、細胞が特定の図形を取得する方法について理解されたまま差別化された運命。高解像度ライブイメージングは​​、従来の方法を補完するものであり、また多細胞上皮シートの形成、維持、および形態形成に関わるダイナミックな細胞プロセスへのより直接的な調査が可能です。ここでは、からアニマルキャップの組織の分離から実験方法を示す<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;一緒に上皮形態形成の分子や細胞の研究を強化することができます上皮細胞との単純な測定手法の共焦点イメージングに胚。

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Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

アフリカツメガエル胚上皮は、上皮形態形成時の極性の開発と形状の変化などの細胞の挙動を研究する理想的なモデルシステムです。固定試料の伝統的な組織は、ますます生細胞の共焦点イメージングによって補完されています。ここでは、カエルの組織を分離し、生きた細胞の共焦点顕微鏡を使用して、ライブ上皮細胞とその細胞骨格を可視化する方法を示しています。

生細胞イメージングとの胚上皮細胞の定量分析アフリカツメガエル</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

プラスチック製の埋め込みとアフリカツメガエル胚のセクショニング

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

アフリカツメガエル女性から卵子を入手

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

アフリカツメガエル卵抽出物の調製と分画

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

アフリカツメガエル卵母細胞のマイクロインジェクション

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

でアニマルキャップの移植（ACT）アッセイを用いて組織の決定アフリカツメガエル</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

分裂酵母の定量的なライブセル蛍光-顕微鏡解析

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

髪の再生の間に上皮間葉シグナル伝達の迅速遺伝子解析

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

間葉転換を誘導し、上皮の分析

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

顔面移植<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;胚

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

定量的RT-PCRによって個々のヒト胚性幹細胞のプロファイリング

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...