Name: preparation of drosophila s2 cells for light microscopy
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי המכון הלאומי לסרטן P30 CA23074, האגודה האמריקנית למלחמה בסרטן מחקר מוסדיים גרנט 74-001-31, ואת Univ. אריזונה GI נבג (NCI / CA9506O NIH).

1. הכנת התאים S2 עבור מיקרוסקופיה תאים שניידר S2 הופקו מעוברים מאוחר trypsinized אורגון R תסיסנית. התרבות המקורית של שניידר מורכב מתערובת של סוגי תאים, אך הפכה הומוגנית יותר עם ​​חלוף המשיכו 1. הם תוארו כמי macrophage דמויי (הם phagocytic) ...

<ol>
	<li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster.">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy.">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly,+dynamics,+and+positioning+of+the+mitotic+spindle.">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li><li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells.">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li></ol>

עבור שדה ביולוגיה של התא, מערכת האידיאלי יהיה זול לתחזוקה, קל לתפעל, ו מקובל מגוון רחב של טכניקות. תאים תסיסנית S2 לספק את הדרישות הללו, ולכן יש להפוך במהירות את המערכת של בחירה עבור מספר הולך וגדל של התא מעבדות הביולוגיה. הצגנו...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>CRL-1963</td>
<td><a href="http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DGRC</td>
<td>stock number 6</td>
<td><a href="https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>R690-07</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sf900 II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10902-096</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>HyClone SFX-Insect</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>SH30278</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect-Xpress</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioWhittaker</td>
<td>12-730</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Schneider's S2 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11720-034</td>
<td>Add 10% (final) heat-inactivated FBS to make complete medium.</td>
</tr>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10438026</td>
<td>heat inactivated</td>
</tr>
<tr>
<td>100x antibiotic solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>91674049</td>
<td>contains penicillin (10000 U/mL), streptomycin (10000 &mu;g/mL), and amphotericin B (25 &mu;g/mL)</td>
</tr>
<tr>
<td>Concanavalin A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>195283</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15714</td>
<td>32% solution</td>
</tr>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Baker</td>
<td>9049</td>
<td>anhydrous, ACS grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Molecular sieves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Acros Organics</td>
<td>19724</td>
<td>type 3A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of drosophila s2 cells for light microscopy

מערכת הניסוי האידיאלי יהיה זול וקל לתחזוקה, מקובל מגוון רחב של טכניקות, יהיה נתמך על ידי ספרות ענפה רצף הגנום באתר. בתרבית תאים תסיסנית S2, תוצר של 20-24 עוברים משויך 1 שעה הישן, בעל כל התכונות האלה. כתוצאה מכך, התאים S2 הם מאוד מתאימים לניתוח של תהליכים תאיים, כולל גילוי הגנים המקודדים את המרכיבים המולקולריים של תהליך או מנגנון של עניין. התכונות של תאים S2 שאחראים ביותר עבור השירות שלהם הקלות שבה הם נשמרים, רגישות מופלאה שלהם להפרעות פעמיים תקועים RNA בתיווך (DS) (RNAi), ו נהילות שלהם מיקרוסקופ פלואורסצנטי כמו גם לחיות או קבוע תאים. תאים S2 ניתן לגדל מגוון רחב של כלי התקשורת, כולל מספר זול, זמין מסחרית, מלא מוגדרים, סרום ללא התקשורת 2. בנוסף, הם גדלים בצורה אופטימלית ובמהירות על 21-24 מעלות צלזיוס, יכול להיות מתורבת במגוון רחב של מיכלים. שלא כמו בתאי יונקים, תאים S2 אינם דורשים אווירה מוסדר, אך במקום לעשות היטב עם אוויר רגיל יכול אפילו להיות נשמר צלוחיות אטום. משלימים את הקלות של RNAi בתאים S2 היא היכולת לנתח בקלות פנוטיפים בניסוי המושרה על ידי שלב או מיקרוסקופ פלואורסצנטי של תאים קבוע או לחיות. תאים S2 לגדול בתרבות כמו בשכבה יחידה, אבל לא להציג עיכוב קשר. במקום זאת, תאים נוטים לגדול במושבות בתרבויות צפופה. באותה צפיפות נמוכה, תרבויות S2 גדל על זכוכית או תרבות שטופלו פלסטיק רקמות עגולות רופף המצורפת. עם זאת, ציטולוגיה של תאים S2 ניתן לשפר במידה ניכרת בכך שפיתה אותם לשטח נרחב על ידי culturing בקצרה אותם על משטח מצופה לקטינים, concanavalin (ConA) 3. תאים S2 יכול להיות גם transfected ביציבות עם סמנים fluorescently-tagged למבנים תווית או אברונים עניין בתאים חיים או קבוע. לכן, התרחיש הרגיל עבור ניתוח מיקרוסקופי של תאים היא זו: הראשונה, תאים S2 (אשר יכול להחזיק transgenes להביע סמנים מתויג) מטופלים על ידי RNAi לחסל את חלבון המטרה (ים). זמן RNAi הטיפול יכול להיות מותאם כדי לאפשר הבדלים חלבון להתהפך קינטיקה כדי למזער טראומה תא / מוות אם חלבון המטרה חשובה הכדאיות. בשלב הבא, בתאים שטופלו מועברים מאכל המכיל coverslip מראש מצופה conA לגרום לתאים להתפשט בחוזקה לדבוק הזכוכית. לבסוף, התאים הם צילמו עם הבחירה של החוקר מצבי במיקרוסקופ. תאים S2 טובים במיוחד ללימודי הדורשים ראיה מורחבת של תאים חיים מאז תאים אלה להישאר בריאים בטמפרטורת החדר ואת האווירה נורמלי.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

תסיסנית שניידר (S2) הם תאים מערכת פופולרי יותר ויותר על גילוי וניתוח פונקציונלי של גנים. המטרה שלנו היא לתאר כמה טכניקות להפוך תאים מיקרוסקופיים S2 כגון מערכת ניסיונית חשוב יותר ויותר.

הכנת תסיסנית תאים S2 עבור במיקרוסקופ אור

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

הכנת עוברים אלקטרונים מיקרוסקופית של תסיסנית לב עוברי צינור

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

בחינה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Terminal תאי קני הזחל על ידי מיקרוסקופ אור

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

אברון תחבורה בתרבית<em&gt; דרוזופילה</em&gt; תאים: תא קו S2 ויסודי נוירונים.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

במשובט מעקב vivo של גזע hematopoietic ובתאים המסומנים על ידי חמישה חלבונים ניאון באמצעות Confocal וmultiphoton מיקרוסקופית

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generating a &#34;Humanized&#34; Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Generating a "Humanized" Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

יצירה &quot;אנושי&quot;<em&gt; דרוזופילה</em&gt; S2 שורת תאים רגיש לתרופתי עיכוב של Kinesin-5

Kinetochores are large protein-based structures that assemble on centromeres during cell division and link chromosomes to spindle microtubules. Proper ...

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy (OCM)

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

הכנת תסיסנית והדמיה אורכית תפקוד הלב in vivo באמצעות מיקרוסקופית קוהרנטיות אופטית (OCM)

Longitudinal study of the heartbeat in small animals contributes to understanding structural and functional changes during heart development. Optical ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

הכנת הדוגמא ביולוגית על ידי הקפאת בלחץ גבוה, שיפור ניגודיות בסיוע מיקרוגל, ושרף מינימלי הטמעה של אמצעי הדמיה

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

שיטת האור המבוססת על ספוט לניתוח דרוזופילה זחל פוטומוניות

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

Cryo-Electron Microscopic Grid Preparation for Time-Resolved Studies using a Novel Robotic System, Spotiton

הכנת רשת מיקרוסקופית קריו-אלקטרון למחקרים שנפתרו בזמן באמצעות מערכת רובוטית חדשנית, Spotiton

The capture of short-lived molecular states triggered by the early encounter of two or more interacting particles continues to be an experimental ...