Name: Xenopus Dissection and Perfusion
Uploaded: 2023-05-16T12:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Xenopus Dissection and Perfusion at JoVE.com

The video provides a detailed guide on the dissection and perfusion process of a frog (Xenopus), outlining steps such as euthanasia, incision techniques, and heart perfusion to visualize blood flow. It emphasizes monitoring tissue responses and ensuring successful perfusion while noting the visual effects on various organs, especially in albino specimens.

xenopus dissection and perfusion

Bloedperfusie bij Afrikaanse klauwkikkers voor transcriptomics en proteomics

The whole body perfusion of amphibians is routinely completed for the purposes of preservation and fixation1,2,3,4,5,6. However, these procedures occur at a rate that limits the number of fresh samples that can be taken per animal. The goal of this work is to develop an effective blood perfusion protocol in Xenopus, prioritizing the speed of the technique. The protocol takes less than 10 min per animal for X. tropicalis and less than 15 min per X. laevis animal. The secondary priorities are the ease of replication and the use of easily acquired equipment so that high-quality samples can be shared widely between Xenopus labs.
Xenopus frogs are used widely in biomedical research to study fundamental biological and pathological processes conserved across species. This tetrapod has a closer evolutionary relationship with mammals than other aquatic models, having lungs, a three-chambered heart, and limbs with digits. The international community effectively uses Xenopus to gain a deeper understanding of human disease through in-depth disease modeling and molecular analysis of disease-related gene function. The numerous advantages of Xenopus as an animal model make them invaluable tools to study the molecular basis of human development and disease; these advantages include: large oocyte and embryo size, high fecundity, ease of housing, rapid external development, and ease of genomic manipulation. Xenopus have been estimated to share ~80% of the identified human disease genes7.
Compared to popular mammalian models, Xenopus is a rapid, cost-effective model, with the ease of morpholino knock-down and availability of efficient transgenics and targeted gene mutations using CRISPR8. Quantitative mass spectrometry and single-cell transcriptomics have been successfully applied to Xenopus embryos9,10,&#160;but a recent cell atlas from Xenopus laevis shows that the composition of most tissues is dominated by blood cell types11. By developing a technique that exsanguinates tissue at a rapid rate and using chilled media, the sample freshness is minimally affected by perfusion. This is particularly important for applications where the goal is to profile physiologically unperturbed mRNA or protein expression.

Auteur in de schijnwerpers: effectieve snelle bloedperfusie bij Xenopus  

Effectieve snelle bloedperfusie bij xenopus

This procedure centers around the humane utilization of amphibian models in a manner that maximizes efficiency. Standardization practices can be applied to samples taken and preserved at the originating colony, mitigating biosecurity risks and eliminating animal transport stress. Profusion can be completed quickly, maximizing the time available to sample tissues while they are still fresh.This freshness is especially important for proteomic and transcriptomic profiling. This protocol is detailed and explicit, making it usable for individuals with a wide variety of backgrounds. This facilitates the sharing of high-quality samples between Xenopus labs.Along with this profusion technique, a similarly comprehensive protocol is being worked on for the standardized sampling of all major organs.

Watch this Scientific Journal Video about Xenopus Dissection and Perfusion at JoVE.com

Xenopus Dissection and Perfusion  

Xenopus Dissectie en perfusie

Controleer na het voltooien van de primaire euthanasie het verlies van pijnrespons door in de voet te knijpen. Leg de kikker op zijn rug. Pin elke ledemaat vast.Snijd door de middellijn van de huid en snijd vervolgens zijdelings om twee huidflappen te maken. Pak de linea alba met een tang en trek hem weg van de coelomic holte. Snijd door de musculatuur.Knip of pin alle flappen uit de weg. Knip door de coracoïde botten met behulp van een dissectieschaar en verwijder overtollig weefsel om betere toegang tot het hart te krijgen. Verschuif vervolgens voorzichtig de maag van de ontlede Xenopus naar de bovenkant van de linker leverkwab.Pak voorzichtig een longpunt vast met een weefseltang en trek deze buiten de coelomic holte en pin de long vervolgens door de punt. Trek het dunne hartzakje strak met een weefseltang. Gebruik de punt van een iridectomieschaar om het hartzakje voorzichtig te perforeren zonder onderliggend weefsel te knippen.Pel het hartzakje weg van de hartkamers. Pak de ventrikel voorzichtig vast met een tang. Zonder de ventrikel te perforeren, steekt u de naald door de sluiting van de tang in de ventrikelkamer.Klem de weefseltang op zijn plaats met behulp van een naaldhouder of hemostat. Start het debiet van de pomp met ongeveer vijf milliliter per minuut. Dit zal de hartkamers en de arteriële romp stuwen.Gebruik een schaar om een inkeping in de juiste oorschelp te maken. Ga door met de pompstroom totdat de vasculatuur van de maag blancheert. Lans de linker hartschelp.Verhoog het debiet van de pomp tot 10 milliliter per minuut. Spoel met behulp van een transferpipet de coelomic holte en perfusiemedia af. Als de organen verschuiven tijdens het spoelen, verschuif ze dan voorzichtig naar achteren om de zichtbaarheid van de maag en longen te behouden.Om het perfusaat dat uit het hart stroomt te visualiseren, kunnen de oorschelpen verder worden verminderd. Houd de naald op zijn plaats totdat de maagvasculatuur en de longen zijn geblancheerd en het perfusaat dat uit het hart stroomt helder lijkt. Succesvolle perfusie werd waargenomen in alle weefsels behalve de lever, waardoor ze duidelijk lichter en minder verzadigd met bloed waren.Dit is het meest zichtbaar bij albino's.

Research

JoVE Journal

Biology

Xenopus Dissection and Perfusion

Effective Rapid Blood Perfusion in Xenopus

Xenopus have been powerful model organisms for understanding vertebrate development and disease for over 100 years. Here, a rapid blood perfusion protocol ...