Name: Xenopus Dissection and Perfusion
Uploaded: 2023-05-16T12:50:00
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The video provides a detailed guide on the dissection and perfusion process of a frog (Xenopus), outlining steps such as euthanasia, incision techniques, and heart perfusion to visualize blood flow. It emphasizes monitoring tissue responses and ensuring successful perfusion while noting the visual effects on various organs, especially in albino specimens.

xenopus dissection and perfusion

Perfusione sanguigna nelle rane artigliate africane per trascrittomica e proteomica

The whole body perfusion of amphibians is routinely completed for the purposes of preservation and fixation1,2,3,4,5,6. However, these procedures occur at a rate that limits the number of fresh samples that can be taken per animal. The goal of this work is to develop an effective blood perfusion protocol in Xenopus, prioritizing the speed of the technique. The protocol takes less than 10 min per animal for X. tropicalis and less than 15 min per X. laevis animal. The secondary priorities are the ease of replication and the use of easily acquired equipment so that high-quality samples can be shared widely between Xenopus labs.
Xenopus frogs are used widely in biomedical research to study fundamental biological and pathological processes conserved across species. This tetrapod has a closer evolutionary relationship with mammals than other aquatic models, having lungs, a three-chambered heart, and limbs with digits. The international community effectively uses Xenopus to gain a deeper understanding of human disease through in-depth disease modeling and molecular analysis of disease-related gene function. The numerous advantages of Xenopus as an animal model make them invaluable tools to study the molecular basis of human development and disease; these advantages include: large oocyte and embryo size, high fecundity, ease of housing, rapid external development, and ease of genomic manipulation. Xenopus have been estimated to share ~80% of the identified human disease genes7.
Compared to popular mammalian models, Xenopus is a rapid, cost-effective model, with the ease of morpholino knock-down and availability of efficient transgenics and targeted gene mutations using CRISPR8. Quantitative mass spectrometry and single-cell transcriptomics have been successfully applied to Xenopus embryos9,10,&#160;but a recent cell atlas from Xenopus laevis shows that the composition of most tissues is dominated by blood cell types11. By developing a technique that exsanguinates tissue at a rapid rate and using chilled media, the sample freshness is minimally affected by perfusion. This is particularly important for applications where the goal is to profile physiologically unperturbed mRNA or protein expression.

Autore in primo piano: Perfusione sanguigna rapida efficace in Xenopus  

Efficace perfusione sanguigna rapida in Xenopus

This procedure centers around the humane utilization of amphibian models in a manner that maximizes efficiency. Standardization practices can be applied to samples taken and preserved at the originating colony, mitigating biosecurity risks and eliminating animal transport stress. Profusion can be completed quickly, maximizing the time available to sample tissues while they are still fresh.This freshness is especially important for proteomic and transcriptomic profiling. This protocol is detailed and explicit, making it usable for individuals with a wide variety of backgrounds. This facilitates the sharing of high-quality samples between Xenopus labs.Along with this profusion technique, a similarly comprehensive protocol is being worked on for the standardized sampling of all major organs.

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Xenopus Dissection and Perfusion  

Xenopus Dissezione e perfusione

Dopo aver completato l'eutanasia primaria, controlla la perdita di risposta al dolore pizzicando il piede. Metti la rana sul dorso. Appunta ogni arto.Tagliare la linea mediana della pelle, quindi tagliare lateralmente per creare due lembi di pelle. Afferrare la linea alba con una pinza e allontanarla dalla cavità celomica. Tagliare la muscolatura.Tagliare o appuntare tutti i lembi fuori strada. Tagliare le ossa coracoidi con l'aiuto delle forbici da dissezione e rimuovere qualsiasi tessuto in eccesso per ottenere un migliore accesso al cuore. Quindi, spostare delicatamente lo stomaco dello Xenopus sezionato nella parte superiore del lobo del fegato sinistro.Afferrare delicatamente una punta polmonare usando una pinza di tessuto e tirarla fuori dalla cavità celomica, quindi fissare il polmone attraverso la punta. Tirare il pericardio sottile stretto con una pinza di tessuto. Utilizzando la punta di un paio di forbici per iridectomia, perforare delicatamente il pericardio senza tagliare alcun tessuto sottostante.Staccare il pericardio dalle camere cardiache. Afferrare delicatamente l'apice del ventricolo con una pinza. Senza perforare il ventricolo, inserire l'ago attraverso la chiusura della pinza nella camera del ventricolo.Bloccare la pinza tissutale in posizione utilizzando un supporto per aghi o un emostato. Avviare il flusso della pompa a circa cinque millilitri al minuto. Questo ingorgerà le camere cardiache e il tronco arterioso.Usa le forbici per fare un nick nel padiglione auricolare destro. Continuare il flusso della pompa fino a quando la vascolarizzazione dello stomaco sbianca. Lancia il padiglione auricolare del cuore sinistro.Aumentare la portata della pompa a 10 millilitri al minuto. Utilizzando una pipetta di trasferimento, sciacquare la cavità celomica e il mezzo di perfusione. Se gli organi si spostano durante il risciacquo, spostarli delicatamente indietro per mantenere la visibilità dello stomaco e dei polmoni.Per aiutare a visualizzare il perfufato che fuoriesce dal cuore, i padiglioni auricolari possono essere ulteriormente ridotti. Tenere l'ago in posizione fino a quando la vascolarizzazione dello stomaco e i polmoni si sono sbiancati e il perfusato che scorre dal cuore appare chiaro. La perfusione di successo è stata osservata in tutti i tessuti tranne il fegato, rendendoli nettamente più leggeri e meno saturi di sangue.Questo è più visibile negli albini.

Research

JoVE Journal

Biology

Xenopus Dissection and Perfusion

Effective Rapid Blood Perfusion in Xenopus

Xenopus have been powerful model organisms for understanding vertebrate development and disease for over 100 years. Here, a rapid blood perfusion protocol ...