Pour commencer, prenez le tube de biopsie cutanée avec un milieu fibroblastique. Retirez le milieu et lavez la biopsie cutanée trois fois avec cinq millilitres de PBS stérile préchauffé. À l’aide de pinces stériles, transférez la biopsie cutanée sur une plaque de culture cellulaire de 10 centimètres et coupez-la en trois ou quatre morceaux avec un scalpel stérile, en laissant l’épiderme et le derme.
Transférer chaque pièce dans une boîte de culture cellulaire en plastique stérile de 35 millimètres et presser doucement dans la boîte de culture. Laissez-le sécher pendant cinq à 10 minutes jusqu’à ce que le liquide s’évapore et que la biopsie soit fixée au plastique de culture cellulaire. À l’aide d’une pipette de 1 000 microlitres, ajouter un millilitre de milieu fibroblastique goutte à goutte autour de la biopsie jusqu’à un volume final de trois millilitres.
Incuber l’échantillon pendant sept jours à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone sans nourrir ni déplacer le plat. À la fin de l’incubation, changer le milieu en milieu de fibroblastes frais et préchauffé. Enfin, utilisez un microscope à contraste de phase pour surveiller les fibroblastes fusiformes devenus trop grands autour de la biopsie cutanée et congelez les cellules sélectionnées après les avoir cultivées.
