للبدء ، خذ قارورة من الخلايا الليفية المستزرعة ، وقم بتغطية لوحة زراعة خلايا طولها 10 سم مناسبة لثقافة hiPSC بأربعة ملليلتر من محلول الطلاء البارد لكل لوحة ، واحتضان اللوحة لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، قم بإزالة الوسائط من الخلايا الليفية واغسلها بأربعة ملليلتر من PBS الذي تم تسخينه مسبقا لكل قارورة. نضح PBS وربط الخلايا الليفية بأربعة ملليلتر من Trypsin-EDTA لكل قارورة عن طريق الحضانة لمدة خمس إلى سبع دقائق عند 37 درجة مئوية.
راقب انفصال الخلايا باستخدام مجهر تباين الطور ، وإذا لزم الأمر ، انقر على جانب القارورة لفصل الخلايا عن السطح البلاستيكي. انقل الخلايا المنفصلة إلى أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلتر واغسل القوارير الفارغة بستة ملليلتر من وسط الخلايا الليفية المسخن مسبقا. جمع وتجميع الخلايا المتبقية في الأنبوب المخروطي.
ثم أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 200 غرام لمدة خمس دقائق عند 20 درجة مئوية. نضح المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية في ثلاثة ملليلتر من برنامج تلفزيوني طازج تم تسخينه مسبقا. عد الخلايا ، انقل 1.5 مرة 10 إلى الخلايا الليفية السادسة في أنبوب مخروطي جديد واملأها ب PBS إلى علامة خمسة ملليمترات.
جهاز طرد مركزي الأنبوب عند 200 غرام لمدة خمس دقائق عند 20 درجة مئوية. تخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق حبيبات الخلية في خمسة ملليلتر من وسط التثقيب الكهربائي ، وأجهزة الطرد المركزي مرة أخرى. في غضون ذلك ، قم بنضح محلول الطلاء من لوحة زراعة الخلايا المطلية التي يبلغ طولها 10 سم وأضف سبعة ملليلتر من وسط الخلايا الليفية الدافئة مسبقا.
في نهاية الطرد المركزي ، تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية في وسط التثقيب الكهربائي بتركيز 1.5 مرة 10 إلى الخلايا السادسة في 250 ميكرولتر. انقل تعليق الخلية سعة 250 ميكرولتر إلى كوفيت التثقيب الكهربائي بمسافة فجوة أربعة ملليمترات. بعد ذلك ، قم بإعداد مزيج نقل البلازما عن طريق إضافة أربعة ميكروغرام من كل بلازميد إلى حجم إجمالي قدره 50 ميكرولتر من وسط التثقيب الكهربائي.
انقل مزيج النقل إلى الكوفيت ، واخلطه برفق عن طريق النقر ، وقم بالكهرباء بنبضة واحدة عند 280 فولت. أخيرا ، انقل 150 ميكرولترا من الخلايا الليفية الكهربائية إلى لوحة زراعة الخلايا المعدة التي يبلغ طولها 10 سم. حرك اللوحة ثلاث مرات في جميع الاتجاهات لتوزيع الخلايا ، واحتضانها بين عشية وضحاها.
توجد الخلايا الليفية في نمط ظاهري طويل يشبه المغزل ، بحجم 150 إلى 300 نانومتر. بعد إعادة البرمجة ، تحدث مستعمرات ذات 50 ميكرومتر من hiPSCs الصغيرة التي تعرض حدودا مميزة. تتميز hiPSCs بنسبة عالية من النوى إلى الجسم وزيادة معدل الانتشار.