בתור התחלה, קחו בקבוק של תאי פיברובלסט בתרבית, צפו צלחת תרבית תאים בקוטר 10 ס"מ המתאימה לתרבית hiPSC בארבעה מיליליטר של תמיסת ציפוי קר לכל צלחת, ודגרו על הצלחת במשך שעה בחום של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הסר את המדיה מהפיברובלסטים ושטוף אותם עם ארבעה מיליליטר PBS שחומם מראש לכל בקבוק. שאפו את PBS וקשרו את הפיברובלסטים עם ארבעה מיליליטר של טריפסין-EDTA לכל בקבוק על ידי דגירה במשך חמש עד שבע דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
נטרו את ניתוק התאים באמצעות מיקרוסקופ ניגודיות פאזה, ובמידת הצורך, טפחו על צד הבקבוק כדי לנתק את התאים משטח הפלסטיק. מעבירים את התאים המנותקים לצינור חרוטי של 50 מיליליטר ושוטפים את הצלוחיות הריקות בשישה מיליליטר של תווך פיברובלסט שחומם מראש. אספו ואגרו את התאים הנותרים בצינור החרוט.
ואז צנטריפוגה את התאים ב 200 גרם במשך חמש דקות ב 20 מעלות צלזיוס. שאפו את הסופרנאטנט והשעו מחדש את גלולת התא בשלושה מיליליטר של PBS טרי שחומם מראש. ספרו את התאים, העבירו 1.5 כפול 10 לפיברובלסטים השישיים לתוך צינור חרוטי חדש והתמלאו ב-PBS עד לסימן החמישה מילימטר.
צנטריפוגה את הצינור ב 200 גרם במשך חמש דקות ב 20 מעלות צלזיוס. השליכו את הסופרנטנט, השהו מחדש את כדורית התא בחמישה מיליליטר של תווך אלקטרופורציה, ושוב צנטריפוגה. בינתיים, שאפו את תמיסת הציפוי מצלחת תרבית התאים המצופה בקוטר 10 ס"מ והוסיפו שבעה מיליליטר של תווך פיברובלסט שחומם מראש.
בסוף הצנטריפוגה, להשליך את supernatant ולהשהות מחדש את כדור התא בתווך electroporation עם ריכוז של 1.5 פעמים 10 לתאים השישי ב 250 מיקרוליטר. מעבירים את תרחיף התא 250 מיקרוליטר לקובט אלקטרופורציה עם מרחק רווח של ארבעה מילימטר. לאחר מכן, להכין תערובת transfection פלזמה על ידי הוספת ארבעה מיקרוגרם של כל פלסמיד לנפח כולל של 50 מיקרוליטר של מדיום electroporation.
מעבירים את תערובת הטרנספקציה לקובט, מערבבים בעדינות על ידי הבהוב, ומתחשמלים בפולס אחד במתח של 280 וולט. לבסוף, להעביר 150 מיקרוליטר של פיברובלסטים electroporated לצלחת תרבית תאים מוכן 10 סנטימטרים. להסעיר את הצלחת שלוש פעמים לכל הכיוונים כדי לפזר את התאים, ולדגור במשך הלילה.
פיברובלסטים קיימים בפנוטיפ ארוך דמוי ציר, בגודל של 150 עד 300 ננומטר. לאחר תכנות מחדש, מושבות עם hiPSCs קטנים של 50 מיקרומטר מתרחשות ומציגות גבולות ברורים. hiPSCs נבדלים על ידי יחס גרעינים לגוף גבוה וקצב התפשטות מוגבר.
