Para começar, ligue o sistema de medição baseado em óptica, a fonte de diodo emissor de luz do microscópio e o computador. Inicie o programa no computador e abra um novo arquivo clicando em novo sob o arquivo no canto superior esquerdo da tela. Clique em coletar, escolha experimentos e, em seguida, selecione IPSC e medições de cálcio.
Em seguida, substitua o meio de cultura de cardiomiócitos IPSC humano por 0,5 mililitros por poço da solução de Tyrode. Em uma placa de 24 poços. Substitua a tampa da placa pela tampa do controle de temperatura e coloque a placa dentro do sistema de medição baseado em óptica no dispositivo ajustado para a temperatura de 37 graus Celsius.
Clique em abrir o localizador de células sob a barra de ferramentas e aguarde até que uma nova tela apareça. Selecione o formato da placa sob o tipo de câmara e bem na parte superior da tela. Selecione um poço e escolha uma área dentro do poço para observar a contração e relaxamento sincronizados.
Pressione iniciar no canto inferior esquerdo da tela. Em seguida, clique em adicionar medida para medir a área. Meça aproximadamente 10 áreas por poço em uma placa de 24 poços.
Para apenas as medições de linha de base, continue a medição a partir do próximo poço. Para testar os compostos, pressione complete assim que as áreas dentro de um poço forem medidas. Abra o instrumento de medição baseado em óptica e adicione o estressor ou composto desejado ao poço.
Após incubar no período de tempo desejado, clique em medição automática para realizar medições pareadas nas mesmas áreas do poço onde as medidas basais foram realizadas. Pressione complete depois que todas as medições forem realizadas. Escolha o próximo poço no canto superior direito da tela e continue as medições de todos os poços necessários.
Depois de medir todos os poços necessários, clique em parar e salve o arquivo no local desejado.
