Efter att ha avbildat den lÀkemedelsbehandlade C.elegane, öppna ND-filen i bilden J-servern med colocalization-plugin och vÀlj alternativet dela bilder i dialogrutan. Varje ND-fil innehÄller bildplan tagna vid tre vÄglÀngder och synligt ljus. Arbeta med ljusfÀlt, gröna och röda bilder.
Generera dubbletter av dessa bilder för att hÄlla originalbilden orörd genom att klicka pÄ bilden och vÀlja duplicera eller anvÀnda kortkommandot shift plus D.Minska sedan bakgrunden genom att generera en annan bilddubblett som visats tidigare. Subtrahera bakgrunden med en rullande radie pÄ 100 och vÀlj alternativet skapa bakgrund för att generera en bild med den givna bildens bakgrund. GÄ nu till processen, klicka pÄ bildkalkylatorn och subtrahera den första duplicerade bilden frÄn den andra duplicerade bilden.
AnvÀnd de resulterande bilderna för samlokaliseringsanalysen. Om du vill anvÀnda plugin-programmet för samlokalisering konverterar du de gröna och röda kanalbilderna till Ätta bitar genom att klicka pÄ bilden, vÀlja typ följt av Ätta bitar. Klicka sedan pÄ plugins och vÀlj samlokalisering.
För att mÀta samlokaliseringen av mitokondrier och lysosomsignaler, stÀll in förhÄllandet till 75%tröskeln röd kanal till 80,0 och tröskeln grön kanal till 50,0. En Ätta bitars binÀr bild som innehÄller samlokaliserad puncta och kombinerar de tre Ätta bitars bilderna i en RGB-bild genereras som utdata. Fokusera sedan pÄ puncta i maskens huvudkroppsvÀggsmuskel genom att manuellt vÀlja omrÄdet och skapa en mask genom att klicka pÄ redigera, markera och skapa mask för att vÀlja intresseomrÄde.
För att vÀlja partiklarna i intresseomrÄdet, anvÀnd bildkalkylatorn för att vÀlja samlokaliserade Ätta bitar och maskerade bilder. AnvÀnd operationen och vÀlj puncta i intresseomrÄdet och generera en bild med puncta i intresseomrÄdet. Slutligen, för att analysera omrÄdet för de samlokaliserade mitokondrierna och lysosomerna, vÀlj analysera, följt av analysera partiklar och mÀta summeringen av puncta mellan 0,1625 kvadratmeter och fyra kvadratmikrometer.
De konfokala bilderna av huvudkroppsvÀggsmusklerna hos maskar visade samlokalisering av mitokondrier och lysosomer. VL-850 inducerade robust mitofagi i maskens huvudkroppsvÀggsmuskler, vilket indikerar en potent mitofagiinducerare. Mitophagy potensen för VL-850 liknade den för FCCP.