התחל את הבדיקה על ידי הנחת צמח מקבל האבקה A.thaliana על צידו, מיקום הפרח המסולסל על הבמה של מיקרוסקופ הפוך כדי לצלם את הסטיגמה. כדי לתקן את המיקום של פרח הנמען המסולק, לשתק את הגבעול באמצעות רצועות של מסקינג טייפ. מצמח תורם האבקה הוציאו פרח בריא ורענן והניחו את צמח תורם האבקה תחת מיקרוסקופ מנתח.
אספו גרגרי אבקה באמצעות מלקחיים עדינים. הסר גרגרי אבקה עודפים על ידי נגיעה קלה במלקחיים כנגד עלי הכותרת של התורם עד ליצירת השכבה החד-שכבתית של גרגר האבקה. חזרו לצמח מקבל האבקה והשתמשו בעדשה אובייקטיבית בהספק נמוך כדי למקד את המיקרוסקופ ההפוך על הצלקת.
מחזיקים את המלקחיים לאורך הפתח בין זרועות המלקחיים, מתקרבים בזהירות לתא פפילה סטיגמטי לא מואבק. המשיכו להתקרב לתא הפפילה הסטיגמטי הלא מואבק עד שגרגירי האבקה הממוקמים כראוי על המלקחיים יוצרים מגע קל עם פני השטח שלו. לאחר אישור חיבור אבקה, לאט לאט למשוך את המלקחיים.
כוונו את גרגר האבקה כך שציר קו המשווה שלו יהיה גלוי ובפוקוס חד, ומיד עברו לעדשה אובייקטיבית בעוצמה גבוהה יותר, כמו פי 20. צלם את תמונת גרגרי האבקה הראשונה כ- T-0, והמשך לצלם תמונות במרווחי זמן של דקה אחת במשך 10 דקות. התאימו את המיקוד כך שיתאים לתנועות קטנות בגרגרי האבקה או בצלקת.
תעד את טמפרטורת הסביבה והלחות היחסית של החדר כל שתי דקות, ואפשר השוואה עתידית בין שכפולים ניסיוניים. שמרו את התמונות בתבנית ללא אובדן נתונים, כגון ND2, לפני שתחזרו על שלבי ההאבקה וההדמיה של גרגרי אבקה נוספים כדי להשיג נתונים לבקרה ולהאבקה ניסיונית. התחל את מדידות הנתונים עבור בדיקת הידרציה אבקה באמצעות תוכנה לניתוח תמונה.
השתמש בפרמטרים דומים של זום דיגיטלי ובגישה המגדירה את גבול האבקה עבור כל המדידות במערכי הנתונים. רשום את ערכי הצירים המשניים למחצה עבור כל נקודות הזמן בערכת הנתונים. לאחר השלמת המדידות עבור ערכת נתונים, יצא את ערכי הצירים הגולמיים המינוריים למחצה של כל נקודת זמן בודדת לגיליון אלקטרוני.
הציגו את הנתונים בעמודות לאוסף תמונות וחשבו את אחוז שינוי הציר החצי-מינורי. חזור על השלבים וקבל נתונים מלפחות 15 גרגרי אבקה מיובשים עבור כל קו צמחים. מספר גרגרי אבקה עלולים להיכשל בהתייבשות או להתייבש באופן איטי משמעותית מהצפוי.
הם ידועים כגרגרי נפל. אל תכלול אותם בערכת הנתונים. חשב את הערכים הממוצעים עבור כל נקודת זמן לכל צמח באמצעות חבילת התוכנה המיוחדת GraphPad Prism.
נתח את נתוני ההידרציה מקווי בר ומוטאנטים בכל נקודת זמן באמצעות מבחן T לא מזווג ו- ANOVA חד-כיווני כדי להשוות את האמצעים של נקודת הזמן הספציפית של העניין. כדי להשוות את האמצעים על פני כל נקודות הזמן, בצע בדיקות T מרובות בין קווי טבע ומוטאנטים על פני נקודות זמן מרובות. נתוני סדרת זמן הידרציה של אבקה עבור צמחי בר שנאספו בימים שונים הראו כי ערכי המינימום והמקסימום עבור האמצעים בין העותקים המשוכפלים עבור כל נקודות הזמן היו בטווח של 3%. נתונים מייצגים אלה עבור האבקות מסוג בר הדגימו רמה גבוהה של עקביות עבור מספרי מדגם נמוכים יחסית ועל פני ימים שונים.
