कलंक को चित्रित करने के लिए उल्टे माइक्रोस्कोप के चरण पर लेबल किए गए ए.थैलियाना पराग प्राप्तकर्ता पौधे को बिछाकर परख शुरू करें। वातित प्राप्तकर्ता फूल की स्थिति को ठीक करने के लिए, मास्किंग टेप की स्ट्रिप्स का उपयोग करके तने को गतिहीन करें। पराग दाता पौधे से, एक स्वस्थ और ताजा खुले फूल को हटा दें और पराग दाता पौधे को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे रखें।
बारीक-बारीक बल का उपयोग करके पराग कणों को इकट्ठा करें। जब तक पराग कण का मोनोलेयर नहीं बन जाता, तब तक दाता पंखुड़ियों के खिलाफ बल को हल्के से छूकर अतिरिक्त पराग कणों को हटा दें। पराग प्राप्तकर्ता पौधे पर लौटें और कलंक पर उल्टे माइक्रोस्कोप पर ध्यान केंद्रित करने के लिए कम शक्ति वाले उद्देश्य लेंस का उपयोग करें।
बल की भुजाओं के बीच के द्वार के साथ बल को पकड़ते हुए, सावधानीपूर्वक संपर्क करें और बिना परागण वाले स्टिग्माटिक पैपिला सेल का उपयोग करें। जब तक बल पर उपयुक्त रूप से स्थित पराग कण इसकी सतह के साथ हल्का संपर्क नहीं करता है, तब तक बिना परागण वाले स्टिग्माटिक पैपिला सेल के पास आना जारी रखें। एक बार पराग लगाव की पुष्टि हो जाने के बाद, धीरे-धीरे बल हटा लें।
पराग कण को उसके भूमध्यरेखीय अक्ष के साथ दृश्यमान और तेज फोकस में उन्मुख करें, और तुरंत 20x की तरह एक उच्च शक्ति उद्देश्य लेंस पर स्विच करें। टी -0 के रूप में पहली पराग कण छवि कैप्चर करें, और 10 मिनट के लिए एक मिनट के अंतराल पर छवियों को कैप्चर करना जारी रखें। पराग कण या कलंक में छोटे आंदोलनों को समायोजित करने के लिए फोकस को समायोजित करें।
हर दो मिनट में कमरे के परिवेश के तापमान और सापेक्ष आर्द्रता को रिकॉर्ड करें, जिससे प्रयोगात्मक प्रतिकृति के बीच भविष्य की तुलना की जा सके। नियंत्रण और प्रयोगात्मक परागण के लिए डेटा प्राप्त करने के लिए अतिरिक्त पराग कणों के लिए परागण और इमेजिंग चरणों को दोहराने से पहले छवियों को एक हानिरहित प्रारूप में सहेजें, जैसे एनडी 2। छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके पराग जलयोजन परख के लिए डेटा माप शुरू करें।
डिजिटल ज़ूम के समान मापदंडों और डेटासेट में सभी मापों के लिए पराग सीमा को परिभाषित करने वाले दृष्टिकोण का उपयोग करें। डेटासेट में सभी समय बिंदुओं के लिए सेमीमाइनर अक्ष मान रिकॉर्ड करें। एक बार जब डेटासेट के लिए माप पूरा हो जाता है, तो प्रत्येक व्यक्तिगत समय बिंदु के कच्चे सेमीमाइनर अक्ष मूल्यों को स्प्रेडशीट में निर्यात करें।
प्रति छवि स्टैक कॉलम में डेटा प्रस्तुत करें और प्रतिशत अर्ध-लघु अक्ष परिवर्तन की गणना करें। चरणों को दोहराएं और प्रत्येक पौधे की रेखा के लिए कम से कम 15 हाइड्रेटेड पराग कणों से डेटा प्राप्त करें। कुछ पराग कण हाइड्रेट करने में विफल हो सकते हैं या अपेक्षा से काफी धीमी गति से हाइड्रेट हो सकते हैं।
उन्हें डड अनाज के रूप में जाना जाता है। इन्हें डेटासेट से बाहर रखें। विशेष सॉफ्टवेयर पैकेज ग्राफपैड प्रिज्म का उपयोग करके प्रति संयंत्र प्रत्येक समय बिंदु के लिए औसत मूल्यों की गणना करें।
विशिष्ट समय बिंदु के साधनों की तुलना करने के लिए अप्रकाशित टी-टेस्ट और वन-वे एनोवा का उपयोग करके प्रत्येक समय बिंदु पर जंगली-प्रकार और उत्परिवर्ती लाइनों से हाइड्रेशन डेटा का विश्लेषण करें। सभी समय बिंदुओं पर साधनों की तुलना करने के लिए, कई समय बिंदुओं पर जंगली-प्रकार और उत्परिवर्ती लाइनों के बीच कई टी-परीक्षण करें। विभिन्न दिनों में एकत्र किए गए जंगली प्रकार के पौधों के लिए पराग जलयोजन समय श्रृंखला डेटा से पता चला है कि सभी समय बिंदुओं के लिए प्रतिकृति के बीच साधनों के लिए न्यूनतम और अधिकतम मान 3% के भीतर थे, जंगली प्रकार के परागण के लिए यह प्रतिनिधि डेटा अपेक्षाकृत कम नमूना संख्या और विभिन्न दिनों में उच्च स्तर की स्थिरता का प्रदर्शन करता है।
