للبدء ، احتضان بيض الدجاج المخصب في حاضنة بيض مرطبة بحيث تكون النهاية المدببة متجهة لأسفل عند 37.5 درجة مئوية. في اليوم السادس من الحضانة ، أو E5 ، قم بتعقيم قشر البيض عن طريق رشه بنسبة 70٪ من الإيثانول. باستخدام شمعة البيض ، تتبع على طول محيط المجال الجوي فوق الجنين بقلم رصاص وقم بتغطية المنطقة المحددة بشريط شفاف.
قطع بلطف حول المنطقة تتبع مع مقص منحني دون قطع في الأغشية الجنينية أو الأوعية الدموية. تخلص من الجزء العلوي من قشر البيض. أضف بضع قطرات من المحلول الملحي أو وسائط زراعة الخلايا على غشاء المجال الجوي لتبليله حتى ينفصل بسهولة.
باستخدام ملقط دقيق ، اخترق بعناية غشاء المجال الجوي فوق الجزء العلوي من الجنين. قم بإزالته. أمسك غشاء السلى الشفاف الذي يحيط بالجنين على الفور لوضع الرأس وحقن حوالي 50،000 خلية في خمسة ميكرولترات من وسائط زراعة الخلايا المناسبة في التيكتوم البصري باستخدام ماصة زجاجية دقيقة ومضخة بيكو هوائية.
أضف بضع قطرات من 50 ملليغرام لكل ملليلتر من الأمبيسلين فوق الجنين وقم بتغطية الفتحة الموجودة في الجزء العلوي من البيض بشريط شفاف. ضعها في حاضنة بيض مرطبة حتى E15 للتشريح. يظهر في هذا الشكل الأورام التي تشكلت في القفص البصري E5 في الجسم الحي بعد حقن الورم الأرومي الدبقي ، أو الخلايا الجذعية GBM ، أو GSCs التي تعبر عن بروتين الفلورسنت الأخضر في E15.
تلتصق GSCs بسطح البطين وتشكل أوراما غازية في جدار الدماغ. تم استخدام أربعة ألوان لتحديد خمس ميزات في هذه التجربة ، GSCs الخضراء ، والنوى البيضاء ، والأوعية الدموية البيضاء ، والأزرق integrin alpha-6 ، وإما SOX2 الأحمر أو Nestin الأحمر. توضح هذه الأرقام أن GSCs موجودة في الأوعية الدموية ويبدو أنها تهاجر على طولها.
يتم عرض أفلام من حجم 3D الدورية إلى شرائح ثابتة ومناعية من أورام GSC في الجسم الحي هنا.
