Til at begynde med inkuberes de befrugtede kyllingæg i en befugtet æginkubator med den spidse ende nedad ved 37,5 grader Celsius. På den sjette inkubationsdag eller E5 steriliseres æggeskallen ved at sprøjte den med 70% ethanol. Brug en æglyser til at spore langs omkredsen af luftrummet over embryoet med en blyant og dække det skitserede område med gennemsigtigt tape.
Skær forsigtigt rundt om det sporede område med buet saks uden at skære ind i embryonale membraner eller blodkar. Kassér toppen af æggeskallen. Tilsæt et par dråber saltvand eller cellekulturmedier på luftrumsmembranen for at våde den, så den let løsner sig.
Brug fine tang til forsigtigt at gennembore luftrumsmembranen over toppen af embryoet. Fjern det. Grib den gennemsigtige amnionmembran, der straks omgiver embryoet for at placere hovedet og injicere omkring 50.000 celler i fem mikroliter egnede cellekulturmedier i det optiske tektum med en glasmikropipette og en pneumatisk PicoPump.
Tilsæt et par dråber 50 milligram pr. Milliliter ampicillin oven på embryoet og dæk hullet i toppen af æggene med klart tape. Placer dem i en befugtet æginkubator indtil E15 til dissektion. De tumorer, der dannes i E5 optisk tectum in vivo efter injektion af glioblastom eller GBM stamceller eller GSC'er, der udtrykker grønt fluorescerende protein ved E15, er vist i denne figur.
GSC'er fastgøres til ventrikulær overflade og danner invasive tumorer i hjernevæggen. Fire farver blev brugt til at identificere fem funktioner i dette eksperiment, grønne GSC'er, hvide kerner, hvide blodkar, blå integrin alfa-6 og enten rød SOX2 eller rød Nestin. Disse tal viser, at GSC'erne bor i dine blodkar og ser ud til at migrere langs dem.
Film med roterende 3D-volumengengivelser til faste og immunfarvede skiver af in vivo GSC-tumorer vises her.
