Om te beginnen, incubeer de bevruchte kippeneieren in een bevochtigde eierincubator met het puntige uiteinde naar beneden gericht bij 37,5 graden Celsius. Op de zesde dag van incubatie, of E5, steriliseer de eierschaal door deze te besproeien met 70% ethanol. Gebruik een eierkaars, traceer langs de omtrek van het luchtruim boven het embryo met een potlood en bedek het omlijnde gebied met transparante tape.
Knip voorzichtig rond het getraceerde gebied met een gebogen schaar zonder in de embryonale membranen of bloedvaten te snijden. Gooi de bovenkant van de eierschaal weg. Voeg een paar druppels zoutoplossing of celkweekmedia toe aan het luchtruimmembraan om het nat te maken, zodat het gemakkelijk loslaat.
Prik met een fijne tang voorzichtig het luchtruimmembraan over de bovenkant van het embryo. Verwijder het. Pak het transparante amnionmembraan dat het embryo onmiddellijk omringt om het hoofd te positioneren en injecteer ongeveer 50.000 cellen in vijf microliter geschikte celkweekmedia in het optische tectum met een glazen micropipette en een pneumatische PicoPump.
Voeg een paar druppels van 50 milligram per milliliter ampicilline toe aan de bovenkant van het embryo en bedek het gat in de bovenkant van de eieren met doorzichtige tape. Plaats ze in een bevochtigde broedmachine voor eieren tot E15 voor dissectie. De tumoren die zich in vivo in het E5-optische tectum hebben gevormd na de injectie van glioblastoom, of GBM-stamcellen, of GSC's die groen fluorescerend eiwit tot expressie brengen bij E15, worden in deze figuur weergegeven.
GSC's hechten zich aan het ventriculaire oppervlak en vormen invasieve tumoren in de hersenwand. Vier kleuren werden gebruikt om vijf kenmerken in dit experiment te identificeren, groene GSC's, witte kernen, witte bloedvaten, blauw integrine alfa-6 en rood SOX2 of rood Nestin. Deze cijfers laten zien dat de GSC's zich in uw bloedvaten bevinden en erlangs lijken te migreren.
Filmpjes van roterende 3D-volumeweergaven naar vaste en immunogekleurde plakjes van in vivo GSC-tumoren worden hier getoond.
