Inkubieren Sie zunächst die befruchteten Hühnereier in einem befeuchteten Ei-Inkubator mit dem spitzen Ende nach unten bei 37,5 Grad Celsius. Am sechsten Tag der Inkubation oder E5 sterilisieren Sie die Eierschale, indem Sie sie mit 70%igem Ethanol besprühen. Zeichnen Sie mit einer Eikerze mit einem Bleistift den Umfang des Luftraums über dem Embryo nach und bedecken Sie den umrissenen Bereich mit transparentem Klebeband.
Schneiden Sie vorsichtig mit einer gebogenen Schere um den nachgezeichneten Bereich herum, ohne in die embryonalen Membranen oder Blutgefäße zu schneiden. Entsorgen Sie die Oberseite der Eierschale. Geben Sie ein paar Tropfen Kochsalzlösung oder Zellkulturmedien auf die Luftraummembran, um sie zu benetzen, damit sie sich leicht ablösen kann.
Stechen Sie mit einer feinen Pinzette vorsichtig in die Luftraummembran über der Oberseite des Embryos. Entferne es. Nehmen Sie die transparente Amnionmembran, die den Embryo unmittelbar umgibt, um den Kopf zu positionieren, und injizieren Sie mit einer Glasmikropipette und einer pneumatischen PicoPump etwa 50.000 Zellen in fünf Mikrolitern geeigneter Zellkulturmedien in das optische Tectum.
Geben Sie ein paar Tropfen von 50 Milligramm pro Milliliter Ampicillin auf den Embryo und decken Sie das Loch in der Oberseite der Eizellen mit durchsichtigem Klebeband ab. Legen Sie sie zur Sektion in einen befeuchteten Ei-Inkubator bis E15. Die Tumoren, die sich nach der Injektion von Glioblastomen oder GBM-Stammzellen oder GSCs, die grün fluoreszierendes Protein an E15 exprimieren, im E5-Optikum in vivo gebildet haben, sind in dieser Abbildung dargestellt.
GSCs heften sich an die Ventrikeloberfläche und bilden invasive Tumore in der Hirnwand. In diesem Experiment wurden vier Farben verwendet, um fünf Merkmale zu identifizieren: grüne GSCs, weiße Kerne, weiße Blutgefäße, blaues Integrin alpha-6 und entweder rotes SOX2 oder rotes Nestin. Diese Zahlen zeigen, dass sich die GSCs in Ihren Blutgefäßen befinden und entlang dieser zu wandern scheinen.
Hier werden Filme von rotierenden 3D-Volumen-Renderings zu fixierten und immungefärbten Schichten von in vivo GSC-Tumoren gezeigt.
