כדי להתחיל, לדגור על ביצי תרנגולת מופרות באינקובטור ביצים לחות עם קצה מחודד פונה כלפי מטה ב 37.5 מעלות צלזיוס. ביום השישי של הדגירה, או E5, לעקר את קליפת הביצה על ידי ריסוס שלה עם 70% אתנול. בעזרת נר ביצה, עקבו בעיפרון לאורך היקף חלל האוויר שמעל העובר וכסו את האזור המתואר בסרט שקוף.
חותכים בעדינות סביב האזור העוקב עם מספריים מעוקלים מבלי לחתוך לתוך הקרומים העובריים או כלי הדם. יש להשליך את החלק העליון של קליפת הביצה. הוסיפו כמה טיפות של מלח או תרבית תאים על קרום חלל האוויר כדי להרטיב אותו כך שהוא יתנתק בקלות.
בעזרת מלקחיים עדינים, מנקבים בזהירות את קרום חלל האוויר מעל החלק העליון של העובר. הסר אותו. תפוס את קרום מי השפיר השקוף המקיף מיד את העובר כדי למקם את הראש ולהזריק סביב 50, 000 תאים בחמישה מיקרוליטרים של מדיה מתאימה לתרבית תאים לתוך טקטום אופטי עם מיקרופיפטה זכוכית ו PicoPump פנאומטי.
מוסיפים כמה טיפות של 50 מיליגרם למיליליטר אמפיצילין על גבי העובר ומכסים את החור בחלק העליון של הביציות בסרט שקוף. מניחים אותם באינקובטור ביצים לח עד E15 לנתיחה. הגידולים שנוצרו בטקטום האופטי E5 in vivo לאחר הזרקת גליובלסטומה, או תאי גזע GBM, או GSCs המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק ב-E15 מוצגים באיור זה.
GSCs נצמדים לפני השטח של החדר ויוצרים גידולים פולשניים בדופן המוח. ארבעה צבעים שימשו לזיהוי חמש תכונות בניסוי זה: GSCs ירוקים, גרעינים לבנים, כלי דם לבנים, אינטגרין אלפא-6 כחול, ואדום SOX2 או נסטין אדום. נתונים אלה מראים כי ה- GSCs שוכנים בכלי הדם שלך ונראה שהם נודדים לאורכם.
סרטים של עיבוד נפח תלת-ממדי מסתובב לפרוסות קבועות ומוכתמות חיסון של גידולי GSC in vivo מוצגים כאן.
