Para comenzar, incube los huevos de gallina fertilizados en una incubadora de huevos humidificada con el extremo puntiagudo hacia abajo a 37.5 grados centígrados. En el sexto día de incubación, o E5, esterilice la cáscara del huevo rociándola con etanol al 70%. Usando una vela de huevo, trace a lo largo del perímetro del espacio aéreo sobre el embrión con un lápiz y cubra el área delineada con cinta transparente.
Corte suavemente alrededor del área trazada con tijeras curvas sin cortar las membranas embrionarias o los vasos sanguíneos. Deseche la parte superior de la cáscara del huevo. Agregue unas gotas de solución salina o medios de cultivo celular en la membrana del espacio aéreo para humedecerla y que se desprenda fácilmente.
Usando pinzas finas, perfore cuidadosamente la membrana del espacio aéreo sobre la parte superior del embrión. Quítalo. Agarre la membrana de amnios transparente que rodea inmediatamente al embrión para colocar la cabeza e inyecte alrededor de 50, 000 células en cinco microlitros de medios de cultivo celular adecuados en el tectum óptico con una micropipeta de vidrio y una PicoPump neumática.
Agregue unas gotas de 50 miligramos por mililitro de ampicilina en la parte superior del embrión y cubra el agujero en la parte superior de los huevos con cinta adhesiva transparente. Colóquelos en una incubadora de huevos humidificada hasta E15 para su disección. Los tumores que se formaron en el tectum óptico E5 in vivo después de la inyección de glioblastoma, o células madre GBM, o GSC que expresan proteína fluorescente verde en E15 se muestran en esta figura.
Las GSC se adhieren a la superficie ventricular y forman tumores invasivos en la pared cerebral. Se utilizaron cuatro colores para identificar cinco características en este experimento, GSC verdes, núcleos blancos, vasos sanguíneos blancos, integrina alfa-6 azul y SOX2 rojo o Nestin rojo. Estas cifras muestran que las GSC residen en sus vasos sanguíneos y parecen estar migrando a lo largo de ellos.
Aquí se muestran películas de renders de volumen 3D giratorio a cortes fijos e inmunoteñidos de tumores GSC in vivo.
