Başlamak için, döllenmiş tavuk yumurtalarını nemlendirilmiş bir yumurta inkübatöründe, sivri ucu 37.5 santigrat dereceye bakacak şekilde inkübe edin. Kuluçkanın altıncı gününde veya E5, yumurta kabuğunu% 70 etanol ile püskürterek sterilize edin. Bir yumurta mumcusu kullanarak, embriyonun üzerindeki hava sahasının çevresi boyunca bir kalemle iz bırakın ve ana hatlarıyla belirtilen alanı şeffaf bantla örtün.
Embriyonik zarları veya kan damarlarını kesmeden izlenen alanın etrafını kavisli makasla yavaşça kesin. Yumurta kabuğunun üstünü atın. Hava sahası zarına birkaç damla salin veya hücre kültürü ortamı ekleyerek kolayca ayrılabilmesi için ıslatın.
İnce forseps kullanarak, hava sahası zarını embriyonun tepesinden dikkatlice delin. Kaldırın. Kafayı konumlandırmak için embriyoyu hemen çevreleyen şeffaf amniyon zarını alın ve beş mikrolitre uygun hücre kültürü ortamında yaklaşık 50.000 hücreyi bir cam mikropipet ve bir Pnömatik PicoPump ile optik tektuma enjekte edin.
Embriyonun üzerine mililitre ampisilin başına birkaç damla 50 miligram ekleyin ve yumurtaların üstündeki deliği şeffaf bantla örtün. Diseksiyon için E15'e kadar nemlendirilmiş bir yumurta inkübatörüne yerleştirin. Glioblastoma veya GBM kök hücrelerinin enjeksiyonundan sonra E5 optik tektumunda in vivo olarak oluşan tümörler veya E15'te yeşil floresan proteini eksprese eden GSC'ler bu şekilde gösterilmiştir.
GSC'ler ventriküler yüzeye yapışır ve beyin duvarında invaziv tümörler oluşturur. Bu deneydeki beş özelliği tanımlamak için dört renk kullanıldı: yeşil GSC'ler, beyaz çekirdekler, beyaz kan damarları, mavi integrin alfa-6 ve kırmızı SOX2 veya kırmızı Nestin. Bu rakamlar, GSC'lerin kan damarlarınızda bulunduğunu ve bunlar boyunca göç ediyor gibi göründüğünü göstermektedir.
İn vivo GSC tümörlerinin sabit ve immün boyalı dilimlerine dönen 3D hacim render filmleri burada gösterilmektedir.
