Om te beginnen met cytologische evaluatie voor het bevestigen van estra-cyclussynchronisatie, verzamelt u voorzichtig de vaginale cellen van de CD1-muis door het wattenstaafje tegen de vaginale wand te rollen met behulp van een klein voorbevochtigd wattenstaafje dat de verzamelde vaginale cellen in een 20 microliter druppel steriel water op een microscoopglaasje en aan de lucht droogt. Gebruik onder een microscoop 100X vergroting met heldere veldverlichting om te evalueren op de aanwezigheid van verhoornde epitheelcellen. Voor cervicale manipulatie, plaats een ontvangend vrouwtje ongeveer 0,5 uur voor de inseminatie op de bovenkant van een kooi met een draadrek, zodat de muis het oppervlak van de kooibalk bij de basis van de staart van de muis kan grijpen met behulp van de duim en wijsvinger en de staart naar boven kan kantelen terwijl het dier wordt gestabiliseerd.
Steek het stompe uiteinde van een klein plastic staafje vaginaal in om contact te maken met de baarmoederhals en tril gedurende 30 seconden door contact met de trimmer. Om een niet-chirurgische spermaoverdracht voor kunstmatige inseminatie uit te voeren, plaatst u het inseminatieapparaat op een P200-pipet die is ingesteld op 40 microliter en verwijdert u de beschermkap. Verwijder een aliquot van het capacitieve spermamonster uit de schaal geplaatst op 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide en breng het over naar een 35 millimeter weefselkweekschaal zonder olie bij 37 graden Celsius, druk de zuiger van de pipet naar de eerste stop.
Laat de punt van de katheter in het spermamonster zakken en laad langzaam 40 microliter van het monster in het overdrachtsapparaat. Verwijder de resterende olie van de buitenkant van het inseminatieapparaat met behulp van een absorberend weefsel voordat u de pipet opzij zet. Plaats vervolgens het ontvangende vrouwtje op de bovenkant van de draadrekkooi.
Houd de vrouwelijke muis in positie door bij de basis van de staart te grijpen, de duim en wijsvinger te gebruiken en de staart naar boven te kantelen terwijl het dier wordt gestabiliseerd. Plaats het kleine speculum in de vagina en breng de katheter van het inseminatieapparaat via de baarmoederhals en in de baarmoeder in het speculum in. Zodra de apparaathub contact maakt met het speculum, wordt het sperma afgegeven door de pipetzuiger naar de eerste stop te drukken.
Als u klaar bent, verwijdert u het apparaat en het speculum.
