Pour commencer l’évaluation cytologique pour confirmer la synchronisation du cycle de l’estra, prélever doucement les cellules vaginales de la souris CD1 en roulant l’écouvillon contre la paroi vaginale à l’aide d’un petit écouvillon pré-humidifié frotter les cellules vaginales collectées dans une goutte de 20 microlitres d’eau stérile sur une lame de microscope et sécher à l’air. Au microscope, utiliser un grossissement 100X avec éclairage en champ clair pour évaluer la présence de cellules épithéliales cornées. Pour la manipulation cervicale, placez une femelle receveuse sur le dessus d’une cage avec un support métallique environ 0,5 heure avant l’insémination permettant à la souris de saisir la surface de la barre de cage près de la base de la queue de la souris à l’aide du pouce et de l’index et d’incliner la queue vers le haut tout en stabilisant l’animal.
Insérez l’extrémité émoussée d’une petite tige de plastique par voie vaginale pour entrer en contact avec le col de l’utérus et vibrer pendant 30 secondes par contact avec la tondeuse. Pour effectuer un transfert de sperme non chirurgical pour insémination artificielle, placez le dispositif d’insémination sur une pipette P200 réglée à 40 microlitres et retirez le couvercle de protection. Retirer une partie aliquote de l’échantillon de sperme capacité de la capsule placée à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone et transférez-la dans une boîte de culture tissulaire de 35 millimètres sans huile à 37 degrés Celsius, appuyez sur le piston de la pipette jusqu’au premier but.
Abaissez l’extrémité du cathéter dans l’échantillon de sperme et chargez lentement 40 microlitres de l’échantillon dans le dispositif de transfert. Retirez l’huile résiduelle de l’extérieur du dispositif d’insémination à l’aide d’un tissu absorbant avant de mettre la pipette de côté. Ensuite, placez la femelle receveuse sur le dessus de la cage grillagée.
Tenez la souris femelle en position en saisissant près de la base de la queue, en utilisant le pouce et l’index et en inclinant la queue vers le haut tout en stabilisant l’animal. Placez le petit spéculum dans le vagin et insérez le cathéter du dispositif d’insémination dans le spéculum à travers le col de l’utérus et dans l’utérus. Une fois que le concentrateur de l’appareil est en contact, le spéculum distribue le sperme en appuyant sur le piston de la pipette jusqu’au premier but.
Une fois cela fait, retirez l’appareil et spéculum.
