Um mit der zytologischen Untersuchung zur Bestätigung der Synchronisierung des Estra-Zyklus zu beginnen, entnehmen Sie vorsichtig die Vaginalzellen der CD1-Maus, indem Sie den Tupfer mit einem kleinen Vorfeuchtestupfer gegen die Vaginalwand rollen, die gesammelten Vaginalzellen in einen 20-Mikroliter-Tropfen steriles Wasser auf einen Objektträger geben und an der Luft trocknen lassen. Verwenden Sie unter einem Mikroskop eine 100-fache Vergrößerung mit Hellfeldbeleuchtung, um das Vorhandensein von verhornten Epithelzellen zu überprüfen. Für die Manipulation des Gebärmutterhalses wird ein Empfängerweibchen etwa 0,5 Stunden vor der Besamung auf einen Käfig mit einem Drahtgestell gelegt, so dass die Maus die Oberfläche der Käfigstange greifen kann, mit Daumen und Zeigefinger in der Nähe des Schwanzansatzes der Maus greift und den Schwanz nach oben neigt, während das Tier stabilisiert wird.
Führen Sie das stumpfe Ende eines kleinen Plastikstäbchens vaginal ein, um den Gebärmutterhals zu berühren, und vibrieren Sie 30 Sekunden lang durch Kontakt mit dem Trimmer. Um einen nicht-chirurgischen Spermientransfer für die künstliche Befruchtung durchzuführen, legen Sie das Befruchtungsgerät auf eine P200-Pipette, die auf 40 Mikroliter eingestellt ist, und entfernen Sie die Schutzhülle. Entnehmen Sie ein Aliquot der kapazitiven Samenprobe aus der Schale, die bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid aufgestellt ist, und geben Sie sie in eine 35 Millimeter große Gewebekulturschale ohne Öl bei 37 Grad Celsius, drücken Sie den Kolben der Pipette bis zum ersten Anschlag.
Senken Sie die Spitze des Katheters in die Samenprobe und laden Sie langsam 40 Mikroliter der Probe in das Transfergerät. Entfernen Sie Restöl von der Außenseite des Besamungsgeräts mit einem saugfähigen Tuch, bevor Sie die Pipette beiseite legen. Als nächstes legen Sie die Empfängerhündin auf die Oberseite des Gitterkäfigs.
Halten Sie die weibliche Maus in Position, indem Sie mit Daumen und Zeigefinger in der Nähe des Schwanzansatzes greifen und den Schwanz nach oben anwinkeln, während Sie das Tier stabilisieren. Führen Sie das kleine Spekulum in die Vagina ein und führen Sie den Katheter des Inseminationsgeräts durch den Gebärmutterhals in das Spekulum in die Gebärmutter ein. Sobald der Gerätehub das Spekulum berührt, geben Sie das Sperma ab, indem Sie den Pipettenkolben bis zum ersten Anschlag drücken.
Wenn Sie fertig sind, entfernen Sie das Gerät und das Spekulum.