エストラサイクルの同期を確認するための細胞学的評価を開始するには、小さな予め湿らせた綿棒を使用して綿棒を膣壁に押し付けてCD1マウスから膣細胞を穏やかに収集し、収集した膣細胞を顕微鏡スライド上の20マイクロリットルの滅菌水滴に塗りつけ、風乾します。顕微鏡下で、明視野照明で100倍の倍率を使用して、角化した上皮細胞の存在を評価します。子宮頸部マニピュレーションの場合は、授精の約0.5時間前にワイヤーラックを備えたケージの上部にレシピエントメスを置き、マウスが親指と人差し指を使用してマウスの尾の付け根近くのケージバーの表面をつかみ、動物を安定させながら尾を上向きに傾けます。
小さなプラスチック棒の鈍い端を膣に挿入して子宮頸部に接触させ、トリマーと接触させて30秒間振動させます。人工授精のための非外科的精子移植を行うには、授精装置を40マイクロリットルに設定したP200ピペットに置き、保護カバーを取り外します。37°Cおよび5%二酸化炭素に置かれたディッシュから容量入り精子サンプルのアリコートを取り出し、摂氏37度で油を含まない35ミリメートルの組織培養皿に移し、ピペットのプランジャーを最初の停止まで押します。
カテーテルの先端を精子サンプルに下げ、40マイクロリットルのサンプルをゆっくりとトランスファーデバイスにロードします。ピペットを脇に置く前に、吸収性組織を使用して授精装置の外側から残留油を取り除きます。次に、受信者の女性をワイヤーラックケージの上部に置きます。
親指と人差し指を使って尾の付け根近くをつかんでメスマウスを所定の位置に保持し、動物を安定させながら尾を上に傾けます。小さな検鏡を膣に入れ、授精装置カテーテルを子宮頸部を通って子宮内に検鏡に挿入します。デバイスハブが検鏡に接触したら、ピペットプランジャーを最初の停止まで押して精子を分注します。
完了したら、デバイスと検鏡を取り外します。
