Para comenzar la evaluación citológica para confirmar la sincronización del ciclo estra, recoja suavemente las células vaginales del ratón CD1 haciendo rodar el hisopo contra la pared vaginal con un pequeño hisopo prehumedecido, frote las células vaginales recolectadas en una gota de 20 microlitros de agua estéril en un portaobjetos de microscopio y seque al aire. Bajo un microscopio, use un aumento de 100X con iluminación de campo claro para evaluar la presencia de células epiteliales cornificadas. Para la manipulación cervical, coloque una hembra receptora en la parte superior de una jaula con una rejilla de alambre aproximadamente 0,5 horas antes de la inseminación, permitiendo que el ratón agarre la superficie de la barra de la jaula cerca de la base de la cola del ratón con el pulgar y el índice e incline la cola hacia arriba mientras estabiliza al animal.
Inserte el extremo romo de una pequeña varilla de plástico por vía vaginal para que entre en contacto con el cuello uterino y vibre durante 30 segundos por contacto con la recortadora. Para realizar una transferencia de esperma no quirúrgica para inseminación artificial, coloque el dispositivo de inseminación en una pipeta P200 ajustada a 40 microlitros y retire la cubierta protectora. Extraer una alícuota de la muestra de semen capacitada de la placa colocada a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono y transferirla a una placa de cultivo de tejidos de 35 milímetros sin aceite a 37 grados centígrados, presionar el émbolo de la pipeta hasta el primer tope.
Baje la punta del catéter en la muestra de esperma y cargue lentamente 40 microlitros de la muestra en el dispositivo de transferencia. Retire el aceite residual del exterior del dispositivo de inseminación con un pañuelo absorbente antes de dejar la pipeta a un lado. A continuación, coloque la hembra receptora en la parte superior de la jaula de la rejilla de alambre.
Sostén a la ratona hembra en su posición agarrándola cerca de la base de la cola, usando el pulgar y el índice e inclina la cola hacia arriba mientras estabilizas al animal. Coloque el pequeño espéculo en la vagina e inserte el catéter del dispositivo de inseminación en el espéculo a través del cuello uterino y dentro del útero. Una vez que el concentrador del dispositivo entra en contacto con el espéculo, dispense el esperma presionando el émbolo de la pipeta hasta el primer tope.
Una vez hecho esto, retire el dispositivo y el espéculo.