כדי להתחיל, זרע HEK293A תאים על החלקות כיסוי מבריק לשים לתוך צלחת 24 באר המכילה DMEM גלוקוז גבוה עד שהם הופכים 80% confluent. למחרת, הרעיב את התאים במשך שעתיים בתמיסת המלח המאוזנת של ארל. לאחר הטיפול, שאפו את המדיום והוסיפו 500 מיקרוליטר או תמיסת פורמלדהיד 4% ב-PBS ודגרו במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר כדי לתקן את התאים.
לאחר הקיבוע, להחליף את הפתרון פורמלין עם 500 מיקרוליטר של PBS. לאחר מכן, הרוו את קבוצת אלדהיד החופשית על ידי הוספת 500 מיקרוליטר של תמיסת אמוניום כלוריד 50 מילימולרית ב- PBS למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. החלף את תמיסת האמוניום כלוריד בתמיסת 500 מיקרוליטר של 50 מיקרוגרם למיליליטר דיגיטונין ב- PBS למשך חמש דקות כדי לחלחל לתאים.
לאחר החלחול, החלף את תמיסת הדיגיטונין ב- 500 מיקרוליטר של PBS החוזר על שטיפת PBS שלוש פעמים. לאחר השטיפה האחרונה, לדגור את התאים ב 500 מיקרוליטר של פתרון חוסם במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר הדגירה, החלף את פתרון החסימה ב -500 מיקרוליטר PBS.
לאחר מכן באמצעות פינצטה, לאסוף את פתקי הכיסוי מן הבאר ולהסיר את PBS עודף באמצעות מגבוני רקמות דקים. בתא הלח, הניחו בעדינות את החלקת הכיסוי עם צד התא כלפי מטה על טיפה של 50 מיקרוליטר של תמיסת נוגדנים ראשונית. לדגור על התאים בתא לח במשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.
לאחר הדגירה, יש לאסוף את פתקי הכיסוי ולרוקן את תמיסת הנוגדנים הראשונית העודפת. הניחו את פתקי הכיסוי בחזרה בצלחת 24 הבאר עם צד התא כלפי מעלה ושטפו אותם שלוש פעמים עם PBS. לאחר השטיפה האחרונה, אספו את החלקות הכיסוי וסנקו את עודפי ה-PBS לפני הנחת כל כיסוי עם צד התא כלפי מטה על טיפה של 50 מיקרוליטר של תמיסת נוגדנים משנית.
יש לדגור בתא לח למשך שעה. לאחר הדגירה, לנקז את תמיסת הנוגדנים המשנית העודפת ולשטוף את הכיסוי שלוש פעמים עם 500 מיקרוליטר של PBS בצלחת 24 באר. לאחר ניקוז עודפי PBS, הניחו כל כיסוי עם צד התא כלפי מטה על טיפה של 50 מיקרוליטר של תמיסת ווים מדוללת אחד עד 4, 000 ב- PBS בתא לח.
דוגרים בתא לח במשך חמש דקות. לאחר מכן, הסר את תמיסת הווים העודפים ושטוף את החלקות הכיסוי שלוש פעמים עם PBS ופעם אחת עם מים נטולי יונים, בצלחת באר 24. לאחר ניקוז עודפי מים נטולי יונים, הניחו כל כיסוי על טיפה של 10 עד 20 מיקרוליטר של תמיסת הרכבה המזוהה על מגלשת מיקרוסקופ כדי למנוע היווצרות של בועות אוויר.
