एटीजी 9 ए संरचनाओं के लाइव सेल इमेजिंग के लिए, उच्च-ग्लूकोज डीएमईएम के दो मिलीलीटर में बीज HEK293A कोशिकाओं को 60-मिलीमीटर ऊतक संवर्धन डिश में तब तक रखा जाता है जब तक कि वे 65 से 70% कंफ्लुएंसी तक नहीं पहुंच जाते। अगले दिन, लिपोफेक्टामाइन डीएनए मिश्रण तैयार करें और सेल कल्चर प्लेट में जोड़ें जिसमें चार मिलीलीटर विकास माध्यम होता है और मिश्रण को समान रूप से वितरित करने के लिए प्लेट को धीरे से आगे और पीछे हिलाएं। 37 डिग्री सेल्सियस और 10% कार्बन डाइऑक्साइड पर कोशिकाओं को इनक्यूबेट करें।
अभिकर्मक के चार घंटे बाद, विकास माध्यम को एक ताजा माध्यम से बदलें और 10% कार्बन डाइऑक्साइड के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर रात भर कोशिकाओं को इनक्यूबेट करें। अगले दिन, ट्रिप्सिन ईडीटीए जोड़कर कोशिकाओं को ट्रिप्सिन करें। फिर, अलग की गई कोशिकाओं की गिनती करें और उन्हें रात भर लाइव माइक्रोस्कोपी के लिए उपयुक्त कल्चर डिश पर फिर से बीज दें।
अगले दिन, एक कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करके कोशिकाओं की छवि बनाएं। बेसल स्थितियों में, एटीजी 9 ए मुख्य रूप से गोल्गी नेटवर्क पर स्थानीयकृत होता है जैसा कि अंतर्जात प्रोटीन के इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा इंगित किया जाता है और जीएम 130, सीआईएस-गोल्गी मार्कर के साथ ओवरलैप होता है। ईजीएफपी एन-टर्मिनल-टैग किए गए एटीजी 9 ए और एमआरएफपी एन-टर्मिनल रूप से टैग किए गए एटीजी 9 ए गोल्गी में कम स्थानीयकृत थे और मुख्य रूप से पुटिकाओं में रहते थे।
इसके विपरीत, ईजीएफपीसी टर्मिनल रूप से टैग किए गए एटीजी 9 ए सेल के भीतर एकत्रित होने के लिए अधिक प्रवण है। एन-टर्मिनल फ्लोरोफोरे और एटीजी 9 ए के बीच 3एक्स-फ्लैग अनुक्रम को फ्यूज करने से अतिरंजित प्रोटीन को अंतर्जात के समान व्यवहार करने में मदद मिली। अतिरंजित एमचेरी 3एक्स-फ्लैग एटीजी 9 ए खिलाए गए स्थितियों में गोल्गी मार्कर जीएम 130 के साथ मिलकर काम करता है।
इस स्थानीयकरण और एजी 9 ए वेसिकुलर कम्पार्टमेंट को समय के साथ संरक्षित किया गया था, जिससे एटीजी 9 ए की तस्करी के स्थानिक अध्ययन की अनुमति मिली।
