ابدأ بنقل جزء واحد من المليلتر الخام من الميتوكوندريا RAW 264.7 إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر. أضف 7 ملليلتر من المخزن المؤقت للميتوكوندريا المملح المكمل ب 150 مليمول كلوريد الصوديوم. إلى التعليق ، أضف 50 ميكرولترا من حبات TOM22 ثم احتضن الأنبوب على عجلة دوارة بسرعة منخفضة.
ضع عمودا على المغناطيس وقم بموازنة العمود بثمانية ملليلتر من محلول الميتوكوندريا المملح. تجاهل التدفق من خلال. بعد حضانة العينة ، انقلها إلى العمود وتجاهل التدفق.
بعد ذلك ، اغسل العمود ثلاث مرات بثمانية ملليلتر من العازلة الميتوكوندريا المملحة. أخرج العمود من المغناطيس وضعه في أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر. لاستئصال الميتوكوندريا ، أضف 1.5 مل من المخزن المؤقت للميتوكوندريا المملح وقم بتطبيق مكبس على الفور لإزالة الجزء المنقى في الأنبوب.
نقل الجزء المستقطب إلى أنبوب جديد 1.5 ملليلتر وإجراء الطرد المركزي في 21،000G لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. تخلص من المادة الطافية المتكونة وقم بتخزين حبيبات الميتوكوندريا البنية النقية عند 20 درجة مئوية للدراسات المستقبلية. أظهر تحليل اللطخة المناعية لمستخلصات الميتوكوندريا المنقاة إثراء سينسيز سترات الميتوكوندريا واستنفاد البروتينات من عضيات الخلايا الأخرى.
كشفت دراسات سلامة الميتوكوندريا باستخدام المجهر الإلكتروني عن الميتوكوندريا ذات الشكل البيضاوي الكلاسيكي وكريستا سليمة محاطة بخرز كثيف الكثافة بالأجسام المضادة. علاوة على ذلك ، أظهر تحليل البروتين إثراء بروتينات الميتوكوندريا ومجموعتين متميزتين تقابلان بروتينات الميتوكوندريا وغير الميتوكوندريا.
