Inizia trasferendo una frazione grezza millilitro di mitocondri RAW 264.7 in un tubo conico da 15 millilitri. Aggiungere 7 millilitri di tampone mitocondriale salato integrato con cloruro di sodio 150 millimolare. Alla sospensione, aggiungere 50 microlitri di perline TOM22 e quindi incubare il tubo su una ruota rotante a bassa velocità.
Posizionare una colonna sul magnete ed equilibrare la colonna con otto millilitri di tampone mitocondriale salato. Eliminare il flusso in corso. Dopo l'incubazione del campione, trasferirlo nella colonna ed eliminare il flusso continuo.
Quindi, lavare la colonna tre volte con otto millilitri di tampone mitocondriale salato. Rimuovere la colonna dal magnete e posizionarla in un tubo conico da 15 millilitri. Per eluire i mitocondri, aggiungere 1,5 millilitri di tampone mitocondriale salato e applicare immediatamente uno stantuffo per eluire la frazione purificata nel tubo.
Trasferire la frazione eluita in un nuovo tubo da 1,5 millilitri ed eseguire la centrifugazione a 21.000 G per 10 minuti a 4 gradi Celsius. Scartare il surnatante formato e conservare il pellet mitocondriale puro marrone a 20 gradi Celsius per studi futuri. L'analisi immunoblot degli estratti mitocondriali purificati ha mostrato l'arricchimento della citrato sintasi mitocondriale e l'esaurimento delle proteine da altri organelli cellulari.
Gli studi sull'integrità mitocondriale che utilizzano la microscopia elettronica hanno rivelato mitocondri con una classica forma ovale e creste intatte circondate da perle rivestite di anticorpi densi di elettroni. Inoltre, l'analisi del proteoma ha mostrato l'arricchimento delle proteine mitocondriali e di due popolazioni distinte corrispondenti alle proteine mitocondriali e non mitocondriali.
