Begynn med å overføre en milliliter råfraksjon av RAW 264.7 mitokondrier til et 15 milliliter konisk rør. Tilsett 7 ml saltet mitokondriell buffer supplert med 150 millimolært natriumklorid. Til suspensjonen, tilsett 50 mikroliter TOM22-perler og inkuber deretter røret på et roterende hjul ved lav hastighet.
Plasser en kolonne på magneten og balanser kolonnen med åtte milliliter saltet mitokondriell buffer. Kast gjennomstrømningen. Etter prøveinkubasjon, overfør den til kolonnen og kast gjennomstrømningen.
Deretter vaskes kolonnen tre ganger med åtte milliliter saltet mitokondriell buffer. Fjern kolonnen fra magneten og legg den i et 15 milliliter konisk rør. For å eluere mitokondriene, tilsett 1,5 ml saltet mitokondriell buffer og påfør umiddelbart et stempel for å eluere den rensede fraksjonen i røret.
Overfør den eluerte fraksjonen til et nytt 1,5 milliliter rør og utfør sentrifugering ved 21 000 G i 10 minutter ved 4 grader Celsius. Kast den dannede supernatanten og oppbevar den brune rene mitokondriepelleten ved 20 grader Celsius for fremtidige studier. Immunoblot-analyse av de rensede mitokondrieekstraktene viste anrikning av mitokondriell citratsyntase og uttømming av proteiner fra andre celleorganeller.
Mitokondrieintegritetsstudier med elektronmikroskopi viste mitokondrier med klassisk oval form og intakt cristae omgitt av elektrontette antistoffbelagte perler. Videre viste proteomanalyse anrikning av mitokondrielle proteiner og to forskjellige populasjoner som tilsvarer mitokondrielle og ikke-mitokondrielle proteiner.
