Börja med att överföra en milliliter råfraktion av RAW 264.7 mitokondrier till ett 15-milliliter koniskt rör. Tillsätt 7 ml saltad mitokondriell buffert kompletterad med 150 ml natriumklorid. Tillsätt 50 mikroliter TOM22-pärlor till suspensionen och inkubera sedan röret på ett roterande hjul med låg hastighet.
Placera en kolonn på magneten och balansera kolonnen med åtta milliliter saltad mitokondriell buffert. Kassera genomflödet. Efter provinkubation, överför den till kolonnen och kassera genomströmningen.
Tvätta sedan kolonnen tre gånger med åtta milliliter saltad mitokondriell buffert. Ta bort kolonnen från magneten och placera den i ett 15 ml koniskt rör. För att eluera mitokondrierna, tillsätt 1,5 ml saltad mitokondriell buffert och applicera omedelbart en kolv för att eluera den renade fraktionen i röret.
Överför den eluerade fraktionen till ett nytt 1, 5 milliliter rör och utför centrifugering vid 21 000G i 10 minuter vid 4 grader Celsius. Kassera den bildade supernatanten och förvara den bruna rena mitokondriella pelleten vid 20 grader Celsius för framtida studier. Immunoblotanalys av de renade mitokondriella extrakten visade anrikning av mitokondriellt citratsyntas och utarmning av proteiner från andra cellorganeller.
Mitokondriella integritetsstudier med elektronmikroskopi avslöjade mitokondrier med en klassisk oval form och intakta cristae omgiven av elektrontäta antikroppsbelagda pärlor. Vidare visade proteomanalys anrikning av mitokondriella proteiner och två distinkta populationer motsvarande mitokondriella och icke-mitokondriella proteiner.