RAW 264.7 mitokondrinin bir mililitrelik ham fraksiyonunu 15 mililitrelik bir konik tüpe aktararak başlayın. 150 milimolar sodyum klorür ile desteklenmiş 7 mililitre tuzlu mitokondriyal tampon ekleyin. Süspansiyona, 50 mikrolitre TOM22 boncuk ekleyin ve ardından tüpü düşük hızda dönen bir tekerlek üzerinde inkübe edin.
Mıknatısın üzerine bir sütun yerleştirin ve sütunu sekiz mililitre tuzlu mitokondriyal tamponla dengeleyin. Akışı atın. Numune inkübasyonundan sonra, kolona aktarın ve akışı atın.
Daha sonra, sütunu sekiz mililitre tuzlu mitokondriyal tamponla üç kez yıkayın. Kolonu mıknatıstan çıkarın ve 15 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirin. Mitokondriden kurtulmak için, 1.5 mililitre tuzlu mitokondriyal tampon ekleyin ve saflaştırılmış fraksiyonu tüpe çıkarmak için hemen bir piston uygulayın.
Salınan fraksiyonu yeni bir 1.5 mililitrelik tüpe aktarın ve 4 santigrat derecede 10 dakika boyunca 21.000G'de santrifüjleme yapın. Oluşan süpernatantı atın ve gelecekteki çalışmalar için kahverengi saf mitokondriyal peleti 20 santigrat derecede saklayın. Saflaştırılmış mitokondriyal ekstraktların immünoblot analizi, mitokondriyal sitrat sentazın zenginleştiğini ve proteinlerin diğer hücre organellerinden tükendiğini göstermiştir.
Elektron mikroskobu kullanılarak yapılan mitokondriyal bütünlük çalışmaları, klasik oval şekilli mitokondri ve elektron yoğun antikor kaplı boncuklarla çevrili bozulmamış krista ortaya çıkardı. Ayrıca, proteom analizi, mitokondriyal proteinlerin ve mitokondriyal ve mitokondriyal olmayan proteinlere karşılık gelen iki ayrı popülasyonun zenginleştiğini göstermiştir.
