Commencez la préparation de la lame de verre en coupant un morceau rectangulaire de nano ruban transparent double face et en le collant au centre d’une lame de verre propre sans retirer le film plastique protecteur sur la face supérieure du ruban. Ensuite, disséquez la goulotte en enlevant la partie supérieure des feuilles plus âgées avec un dénudeur métallique. Tenez ensuite la goulotte par le mésocaudal et retirez soigneusement les feuilles environnantes avec une sonde dentaire pour extraire les primordia d’intérêt.
Pour le montage du primordium, retirez le film protecteur de la bande. Posez le primordium exposé sur la bande. Couper le primordium à la base à l’aide d’une lame de rasoir, en jetant la tige basale et l’hypocaudale.
Pour un déroulement plus doux, lubrifiez la surface interne ou adaxiale de la feuille en plongeant l’extrémité de l’aiguille dans 100% de glycérol. Déroulez le primordium à l’aide d’une sonde dentaire avec une aiguille pliée. Placez l’extrémité de l’aiguille parallèlement à la surface et déployez la marge basale externe en la pressant doucement contre le ruban.
Avec la marge extérieure adhérant à la bande, alignez la pointe de l’aiguille parallèlement à l’axe long de la feuille. Faites glisser doucement l’aiguille sur le côté pour dérouler et aplatir la feuille sur le ruban. Appliquez une goutte d’eau sur le primordium déroulé.
Placez immédiatement un couvercle sur la goutte d’eau et le primordium. Appuyez doucement sur les bords du couvercle pour qu’ils adhèrent au ruban. Une fois cela fait, placez la lame sur la platine du microscope à épifluorescence pour visualiser le fluorophore.
Cette méthode a été suivie pour visualiser et analyser l’expression des protéines fluorescentes dans les primordia des feuilles de maïs. Complémentaire à l’analyse de la section transversale. L’analyse du montage de la feuille entière a révélé des modèles de réponse formelle spécifiques aux tissus et aux stades pendant la formation des veines.
La méthode d’analyse de la monture entière a permis des analyses qualitatives et quantitatives de l’expression des protéines fluorescentes dans les primordia des feuilles de maïs, ce qui indique l’efficacité de cette méthode dans l’examen des primordia des feuilles de maïs qui sont difficiles à imager en raison de leur morphologie laminée.
