Beginnen Sie mit der Vorbereitung des Objektträgers, indem Sie ein rechteckiges Stück durchsichtiges, doppelseitiges Nanoklebeband abschneiden und in die Mitte eines sauberen Objektträgers kleben, ohne die schützende Plastikfolie auf der Oberseite des Klebebandes zu entfernen. Als nächstes präparieren Sie die Rutsche, indem Sie den oberen Teil der älteren Blätter mit einer Abisolierzange entfernen. Halten Sie dann die Rutsche am Mesocaudal fest und entfernen Sie vorsichtig die umliegenden Blätter mit einer Zahnsonde, um die interessierenden Primordien zu extrahieren.
Entfernen Sie zur Montage des Primordiums die Schutzfolie vom Klebeband. Legen Sie das freiliegende Primordium auf das Klebeband. Schneiden Sie das Primordium an der Basis mit einer Rasierklinge ab und werfen Sie den basalen Stiel und den hypokaudalen weg.
Für ein sanfteres Abrollen schmieren Sie die innere oder adaxiale Blattoberfläche, indem Sie die Nadelspitze in 100%iges Glycerin tauchen. Rollen Sie das Primordium mit einer Zahnsonde mit einer gebogenen Nadel ab. Positionieren Sie die Nadelspitze parallel zur Oberfläche und entfalten Sie den äußeren Basalrand, indem Sie ihn vorsichtig gegen das Band drücken.
Richten Sie die Nadelspitze mit dem äußeren Rand auf dem Band parallel zur Längsachse des Blattes aus. Schieben Sie die Nadel vorsichtig zur Seite, um das Blatt abzurollen und auf dem Klebeband flach zu drücken. Tragen Sie einen Tropfen Wasser auf das ausgerollte Primordium auf.
Legen Sie sofort ein Deckglas auf den Wassertropfen und das Primordium. Drücken Sie die Kanten des Deckglases vorsichtig nach unten, damit sie am Klebeband haften. Wenn Sie fertig sind, legen Sie den Objektträger auf den Tisch des Epifluoreszenzmikroskops, um den Fluorophor zu visualisieren.
Diese Methode wurde angewandt, um die fluoreszierende Proteinexpression in Maisblattprimordien sichtbar zu machen und zu analysieren. Komplementär zur Querschnittsanalyse. Die Analyse der gesamten Blattmontage ergab gewebe- und stadienspezifische Muster der formalen Reaktion während der Venenbildung.
Die Whole-Mount-Analysemethode ermöglichte qualitative und quantitative Analysen der fluoreszierenden Proteinexpression in den Maisblatt-Primordien, was auf die Wirksamkeit dieser Methode bei der Untersuchung der Maisblatt-Primordien hinweist, die aufgrund ihrer gerollten Morphologie schwer abzubilden sind.
