スライドガラスの準備は、透明な両面ナノテープの長方形片を切断し、テープの上側の保護プラスチックフィルムを剥がさずにきれいなスライドガラスの中央に貼り付けることから始めます。次に、ワイヤーストリッパーで古い葉の上部を取り除いてシュートを解剖します。次に、シュートを中尾部で保持し、歯科用プローブで周囲の葉を慎重に取り除き、目的の原基を抽出します。
原基を取り付けるには、テープから保護フィルムをはがします。露出した原基をテープの上に置きます。かみそりの刃を使って基部の原基を切り、基底茎と尾下を捨てます。
よりスムーズに展開するには、針先を100%グリセロールに浸して、内側または軸方向の葉の表面を滑らかにします。針を曲げた歯科用プローブを使用して原基を広げます。針先を表面に平行に配置し、外側の基底縁をテープにそっと押し付けて広げます。
外側の縁がテープに付着した状態で、針先を葉の長軸に平行に合わせます。針を横にゆっくりとスライドさせて広げ、葉をテープの上に平らにします。広げた原基に一滴の水をかけます。
すぐに水滴と原基の上にカバースリップを置きます。カバースリップの端をゆっくりと押し下げて、テープに付着させます。完了したら、スライドを落射蛍光顕微鏡ステージに置き、蛍光色素を視覚化します。
この方法に従い、トウモロコシ葉原基における蛍光タンパク質発現を可視化および解析した。横断面解析を補完します。全葉マウント分析により、静脈形成中の形式的応答の組織および段階特異的パターンが明らかになりました。
ホールマウント解析法は、トウモロコシ葉原基における蛍光タンパク質発現の定性的・定量的解析を可能にし、ロール形態のために画像化が困難なトウモロコシ葉原基の検査に有効であることが示された。
