Comience la preparación del portaobjetos de vidrio cortando una pieza rectangular de nano cinta transparente de doble cara y pegándola al centro de una diapositiva de vidrio limpio sin quitar la película plástica protectora en la parte superior de la cinta. A continuación, disecciona el conducto quitando la parte superior de las hojas más viejas con un decapante de alambre. Luego sostenga la rampa por el mesocaudal y retire cuidadosamente las hojas circundantes con una sonda dental para extraer los primordios de interés.
Para montar el primordio, retire la película protectora de la cinta. Coloque el primordio expuesto sobre la cinta. Cortar el primordio en la base con una cuchilla de afeitar, descartando el tallo basal y el hipocaudal.
Para un desenrollado más suave, lubrique la superficie interna o adaxial de la hoja sumergiendo la punta de la aguja en 100% de glicerol. Desenrolle el primordio con una sonda dental con una aguja doblada. Coloque la punta de la aguja paralela a la superficie y despliegue el margen basal externo presionándolo suavemente contra la cinta.
Con el margen exterior adherido a la cinta, alinee la punta de la aguja paralela al eje largo de la hoja. Deslice suavemente la aguja hacia los lados para desenrollar y aplanar la hoja sobre la cinta. Aplique una gota de agua al primordio desenrollado.
Coloque inmediatamente un cubreobjetos sobre la gota de agua y el primordio. Presione suavemente los bordes del deslizamiento de la cubierta para que se adhieran a la cinta. Una vez hecho esto, coloque el portaobjetos en la etapa del microscopio de epifluorescencia para visualizar el fluoróforo.
Este método se siguió para visualizar y analizar la expresión de proteínas fluorescentes en primordios de hojas de maíz. Complementario al análisis de sección transversal. El análisis de montaje de toda la hoja reveló patrones específicos de tejido y etapa de respuesta formal durante la formación de venas.
El método de análisis de montaje completo permitió análisis cualitativos y cuantitativos de la expresión de proteínas fluorescentes en los primordios de la hoja de maíz, lo que indica la efectividad de este método para examinar los primordios de la hoja de maíz que son difíciles de visualizar debido a su morfología enrollada.
