Name: Mouse Inner Ear Extraction and Stria Vascularis Dissection (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-04-21T12:50:00
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mouse inner ear extraction and stria vascularis dissection

Dissection of Adult Mouse Stria Vascularis for Single-Nucleus Sequencing or Immunostaining

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Mouse Inner Ear Extraction and Stria Vascularis Dissection (Video) | JoVE 

Estrazione dell'orecchio interno del topo e dissezione della stria vascolare

Per iniziare, identifica l'orecchio interno all'interno dell'osso temporale di un topo eutanasia. Raschia via i nervi cranici usando il forcipe numero 55. Quindi utilizzare la pinza numero 55 per sezionare la bulla e la capsula, staccandole dall'osso circostante.Rimuovere qualsiasi tessuto molle residuo dalla superficie dell'orecchio interno. Per la dissezione SV, utilizzare una pinza numero 55 per tenere il campione dalla porzione vestibolare con la cocleare rivolta verso l'alto. Forare l'osso cocleare all'apice usando la stessa pinza.Raschiare lungo la curva apicale, applicando una forza delicata per rompere piccoli pezzi dello strato osseo esterno. Sollevare delicatamente l'osso e staccarlo dalla parete laterale. Utilizzando la pinza numero 55 rimuovere pezzi di osso cocleare dalle curve apicali e centrali.Spingendo delicatamente verso il basso la parete laterale, fare leva e rimuovere i pezzi della parete ossea verso la curva centrale per esporre la parete laterale delle curve apicale e centrale. Spingere la parete laterale di rotazione apicale da parte per esporre il ganglio a spirale. Staccare la parete laterale delle curve apicali e centrali dal ganglio a spirale lungo lo strato esterno delle cellule ciliate.Quindi rimuovere pezzi di ganglio a spirale dall'interno della coclea. Staccare la cocleare dalla porzione vestibolare dell'osso temporale inserendo la pinza nella finestra rotonda e ovale e spingendo verso il basso verso il vestibolo per avere un migliore accesso alla parete laterale della svolta basale. Dopo che la cocleare è stata staccata, rimuovere la porzione vestibolare dell'orecchio interno.Dare priorità alla conservazione del maggior numero possibile di vagabondi. Continuare a rimuovere fino a quando l'osso del giro centrale non viene staccato dall'SV. Quindi, rimuovere i pezzi dell'osso cocleare rimanente che coprono la svolta basale. Questo può essere ottenuto spingendo lo strato di parete laterale sotto l'osso per staccarlo.Fare leva e tirare delicatamente il tessuto per rimuovere la parte basale più lontana della parete laterale facendo attenzione a non danneggiare il tessuto molle sottostante. Con la parte basale della parete laterale staccata, separare la parete laterale dalla restante cocleare tracciando la pinza lungo la parete laterale. Spazzolare delicatamente la pinza tra l'osso e la parete laterale rimanente fino a raggiungere l'apice.Quindi spostare la parete laterale su un PBS fresco. Posare la parete laterale piatta rivelando la SV come uno strato più scuro di tessuto sul lato interno della parete laterale. Sollevare delicatamente lo strato SV lontano dalla parete laterale.Spingere da parte l'SV staccato e far avanzare la pinza lungo la parete laterale tentando di staccare la SV come un lungo nastro, cercando di non schiacciare la SV. Utilizzare uno smisurino di tessuto per raccogliere il tessuto fragile. I cocleari sono stati sezionati da topi adulti di età maggiore o uguale al giorno 30 postnatale. L'orecchio interno è stato estratto dall'osso temporale circostante.SV è stato esposto dopo la rimozione dell'osso che copre la curva centrale. L'SV è stato completamente separato dalla parete laterale dopo la dissezione.