Förbered dig för immunfärgning genom att dissekera stria vascularis från musen och tillsätt vävnaden till en 24-brunnsplatta innehållande 200 mikroliter 4% paraformaldehyd i 1X PBS. Inkubera vävnaden i 20 minuter vid rumstemperatur. utföra två korta tvättar på 1X PBS på en orbitalskakare vid lågt varvtal.
Ta bort PBS, utför sedan permeabilisering och blockering i minst en timme vid rumstemperatur i 300 mikroliter PBST-lösning. Färga sedan vävnaden med den primära antikroppen över natten vid fyra grader Celsius. Tillsätt sedan en sekundär antikropp och inkubera i två timmar vid rumstemperatur på en orbitalskakare vid lågt varvtal.
Täck plattan för att skydda den fluorescerande märkta sekundära antikroppen från ljus. Förbered sedan en större mikroglid genom att placera två små limstreck längs 25 mm-axeln, bara mindre än 18 x 18 millimeter glasskydd. Placera en droppe monteringsreagens mellan limstrimmorna.
Använd nummer 55 pincett, gab så lite vävnad som möjligt i ena änden av SV och överför den från PBS till monteringsreagenset. Placera ena änden av lockslipen på bilden där en limstrimma placerades. Släpp sedan försiktigt locket för att undvika att skapa luftbubblor.
Försegla fästet genom att badda en droppe transparent nagellack i varje hörn av fästet. Märk provet på glasluckan, bort från visualiseringsfältet. Visualisera SV-vävnaden under ett dissektionsmikroskop för att säkerställa att den ligger platt och inte nära några luftbubblor.
Om SV-vävnaden inte är korrekt orienterad, försök att trycka ut luftbubblor eller försiktigt ta bort det mindre glaslocket och flytta SV. Ett helt fäste av SV från P30-mus förbereddes och konfokal avbildning utfördes. ZsGreen-uttryck observerades i mellancellerna, GSIB4 märkta endotelceller och DAPI märkte kärnorna.