Name: analysis of dna double-strand break (dsb) repair in mammalian cells
Uploaded: 2010-09-08T17:00:00
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원래 GFP - Pem1 박사 레이 리의 선물했다. 이 작품은 NIH와 엘리슨 의료 재단에서 VG에 부여하여 이름으로 지원했습니다

이 프로토콜에서는 DSBs가 과도 표현 드문 절삭 endonuclease I - SceI 3 생체내에서 유도된 아르 1,2를 구성 chromosomally 통합 기자와 DNA DSB 복구 분석하는 방법을 설명합니다. 통합 분석은 염색체 컨텍스트 내에서 DSB 복구를 분석의 이점을 제공합니다. 그러나,이 프로토콜은 기본 세포와 함께 작업할 때 문제가있을 수 있습니다 passaging 장시간 휴대를 필요로합니다. <p class="jove_cont...

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	<li>Mao, Z., Seluanov, A., Jiang, Y., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRF2+is+required+for+repair+of+nontelomeric+DNA+double-strand+breaks+by+homologous+recombination.">TRF2 is required for repair of nontelomeric DNA double-strand breaks by homologous recombination.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 13068-13073 (2007).</li><li>Mao, Z., Bozzella, M., Seluanov, A., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+nonhomologous+end+joining+and+homologous+recombination+in+human+cells.">Comparison of nonhomologous end joining and homologous recombination in human cells.</a> DNA Repair (Amst). 7, 1765-1771 (2008).</li><li>Rouet, P., Smih, F., Jasin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+a+site-specific+endonuclease+stimulates+homologous+recombination+in+mammalian+cells.">Expression of a site-specific endonuclease stimulates homologous recombination in mammalian cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 91, 6064-6068 (1994).</li><li>Mao, Z., Jiang, Y., Xiang, L., Seluanov, A., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+repair+by+homologous+recombination,+but+not+by+nonhomologous+end+joining,+is+elevated+in+breast+cancer+cells.">DNA repair by homologous recombination, but not by nonhomologous end joining, is elevated in breast cancer cells.</a> Neoplasia. 11, 683-691 (2009).</li><li>Seluanov, A., Mittelman, D., Pereira-Smith, O. M., Wilson, J. H., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+end+joining+becomes+less+efficient+and+more+error-prone+during+cellular+senescence.">DNA end joining becomes less efficient and more error-prone during cellular senescence.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 7624-7629 (2004).</li><li>Mao, Z., Bozzella, M., Seluanov, A., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+repair+by+nonhomologous+end+joining+and+homologous+recombination+during+cell+cycle+in+human+cells.">DNA repair by nonhomologous end joining and homologous recombination during cell cycle in human cells.</a> Cell Cycle. 7, 2902-296 (2008).</li></ol>

형광 NHEJ 및 인사 기자 assays은 별도로 생체내 각 DSB 복구 경로를 측정하기위한 양적 방법을 제공합니다. 외과 안정 20000 세포에서 10 GFP의 + 세포를 검색할 수 assays 매우 민감합니다. assays는 DSBs 2의 유도 후 몇 분, 아님 몇 시간 이내에 GFP + 세포의 모양을 감지하여 &quot;실시간&quot;에 복구 이벤트를 측정하기위한 적응 수 있습니다. 또한, GFP + 세포의 분석 DSB 복구가 다양한 약물 치료되...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>EndoFree Plasmid Maxi kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>12362</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Qiaex II Gel Extraction Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>20021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amaxa Nucleofector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>AAD-1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Geneticin (G418)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11811-031</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pDsRed2-N1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Clontech</td>
<td>632406</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Round bottom tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352058</td>
<td>FACS tubes</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

analysis of dna double-strand break (dsb) repair in mammalian cells

DNA 이중 가닥의 휴식 시간은 유전 정보 및 세포 사망의 대규모 손실로 이어질 수있는 가장 위험한 DNA의 병변입니다. 가입 nonhomologous 엔드 (NHEJ)와 상동 재조합 (HR) : 두 가지 주요 경로를 사용하여 셀 수리 DSBs. NHEJ와 HR의 Perturbations 자주 조기 노화와 tumorigenesis와 관련된, 따라서 그것은 각 DSB 복구 경로을 측정하는 양적 방법이 중요합니다. 저희 연구실은 NHEJ와 HR의 민감하고 정량적 측정을 허용 형광 리포터 구조를 개발했습니다. 구성은 DSBs의 유도를위한 드문 절감 I - SceI의 endonuclease에 대한 인식 사이트를 포함하는 설계 GFP 유전자를 기반으로합니다. GFP 유전자가 추가 엑슨에 의해 inactivated, 또는 돌연변이에 의해 그대로 시작 구조는 GFP 아무것도 없습니다. NHEJ 또는 HR하여 I - SceI 유발 나누기의 성공적인 복구 기능 GFP 유전자를 복원합니다. 유동세포계측법로 가늠 GFP 양성 세포의 수는 NHEJ 또는 HR 효율 양적 측정을 제공합니다.

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Analysis of DNA Double-strand Break DSB Repair in Mammalian Cells

이 문서는 GFP 기반의 형광을 설명합니다<em&gt; 생체내에</em&gt; 별도로 상동 재조합을 계량하고 nonhomologous 포유 동물 세포에 입사 최종 assays.

포유 동물 세포의 DNA 이중 가닥 브레이크 (DSB) 수리 분석

DNA double-strand breaks are the most dangerous DNA lesions that may lead to massive loss of genetic information and cell death.  Cells repair DSBs using ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of DNA Double-strand Break (DSB) Repair in Mammalian Cells

DNA Transfection of Mammalian Skeletal Muscles using In Vivo Electroporation

DNA Transfection of Mammalian Skeletal Muscles using In Vivo Electroporation

사용 포유류 골격 근육의 유전자 Transfection VIVO에서 Electroporation

 A growing interest in cell biology is to express transgenically modified forms of essential proteins (e.g. fluorescently tagged constructs and/or mutant ...

연구

생물학

Intranuclear Microinjection of DNA into Dissociated Adult Mammalian Neurons

Dissociated 성인 포유류의 뉴런으로 DNA의 Microinjection Intranuclear

Primary neuronal cell cultures are valuable tools to study protein function since they represent a more biologically relevant system compared to ...

Pulse-chase Analysis of N-linked Sugar Chains from Glycoproteins in Mammalian Cells

포유 동물 세포에 Glycoproteins의 N - 연결 설탕 체인 펄스 체이스 분석

Attachment of the Glc3Man9GlcNAc2 precursor oligosaccharide to nascent polypeptides in the ER is a common modification for secretory proteins. Although ...

Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells

이온 채널의 돌연변이 유발과 기능 분석 Heterologously 포유 동물 세포에 표현

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

사용 Schwann - astrocyte 상호 작용 분석 체외에서 Assays

Schwann cells are one of the commonly used cells in repair strategies following spinal cord injuries. Schwann cells are capable of supporting axonal ...

Analysis of mRNA Nuclear Export Kinetics in Mammalian Cells by Microinjection

Microinjection하여 포유 동물 세포에서 mRNA 원자력 수출 속도론 분석

In eukaryotes, messenger RNA (mRNA) is transcribed in the nucleus and must be exported into the cytoplasm to access the translation machinery. Although ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

포유 동물 세포의 세포주기의 위치 분석

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

비례 생체 분자 비콘을 사용하여 살아있는 세포의 단일 엔지니어링 RNA 성적 증명서의 실시간 영상

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

포유 동물 세포에서 헴 합성 레벨 측정

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...

Examination of Proteins Bound to Nascent DNA in Mammalian Cells Using  BrdU-ChIP-Slot-Western Technique

포유 동물 세포에서 초기 DNA에 바인딩 단백질의 시험 BrdU의 칩 슬롯 서양 기술을 사용하여

Histone deacetylases 1 and 2 (HDAC1,2) localize to the sites of DNA replication. In the previous study, using a selective inhibitor and a genetic ...