세포 배양을 시작하려면 세포 배양에 필요한 DMEM 배양 배지와 용액을 준비합니다. 1 x 10 처리 조건 플러스 대조군 당 60 밀리미터 플레이트 또는 6-웰 플레이트에서 6번째 HEK293 세포를 시드한다. 다음날, 선택한 유도제인 DNA-단백질 가교 또는 DPC로 세포를 처리합니다.
DPC, 유비퀴틸화 및 SUMOylation을 유도하기 위해 20분, 60분 및 180분에 세포를 수집하거나 비효소적 DPC의 경우 2시간에 세포를 수집합니다. TOP1-DPCs의 PARylation을 유도하기 위해, 세포를 10 마이크로몰 폴리-ADP-리보스 글리코하이드롤라제 또는 PARG 억제제 PDD00017273로 전처리한 후 20 마이크로몰 캄프토테신으로 20, 60 및 180분 동안 공동 처리한다.