Для начала культивирования клеток подготовьте питательную среду DMEM и растворы, необходимые для культивирования клеток. Высевают 1 x 10 в 6-ю ячейку HEK293 в 60-миллиметровую пластину или 6-луночную пластину для каждого условия обработки плюс контроль. На следующий день обработайте клетки ДНК-белковыми сшивками, или DPC, индукторами выбора.
Для индуцирования ДПК, их убиквитилирования и SUMOylation собирают клетки через 20, 60 и 180 минут, или два часа в случае неферментативных ДПК. Чтобы индуцировать PARylation TOP1-DPCs, предварительно обработайте клетки 10 микромолярной поли-АДФ-рибозной гликогидролазой или ингибитором PARG PDD00017273 в течение одного часа, а затем совместно обработайте 20 микромолярами камптотецином в течение 20, 60 и 180 минут.