För att påbörja cellodlingen, förbered DMEM-odlingsmediet och lösningarna som krävs för cellodling. Sådd 1 x 10 till de 6:e HEK293-cellerna i en 60-millimetersplatta eller en 6-hålsplatta per behandlingstillstånd plus kontroll. Nästa dag behandlar du cellerna med DNA-proteintvärbindningar, eller DPC, som är valfria inducerare.
För att inducera DPC, deras ubiquitylering och SUMOylering, samla cellerna efter 20, 60 och 180 minuter, eller två timmar vid icke-enzymatiska DPC. För att inducera PARylering av TOP1-DPC, förbehandla cellerna med 10 mikromolar poly-ADP-ribosglykohydrolas, eller PARG-hämmare PDD00017273, i en timme innan sambehandling med 20 mikromolära kamptothecin i 20, 60 och 180 minuter.