首先,准备斑马鱼安装和定位所需的实验和材料。在体视显微镜下,观察瘫痪的斑马鱼幼虫以验证其运动是否已停止。通过检查幼虫的心跳来目视评估幼虫的健康状况。
然后,使用移液管将单个幼虫斑马鱼放入含有琼脂糖凝胶的1.5毫升微量离心管中。将琼脂糖凝胶倒入培养皿中,制成一到两毫米的涂层。使用移液管将幼虫从微量离心管转移到培养皿中。
确保将幼虫放在盘子的中心。使用镊子将幼虫定位在所需的方向,使头部和尾部平坦。然后,使用镊子旋转幼虫以平整双眼。
对齐完成后,等到琼脂糖凝胶凝固后,再用蛋水填充培养皿。将带有嵌入幼虫的培养皿放在显微镜载物台上进行图像采集。打开显微镜,将幼虫定位在视野中心。
使用图像采集软件设置成像参数。如果图像饱和,请降低激光功率。接下来,通过移动载物台找到幼虫的大脑,并通过手动上下更改焦平面,使用软件中的实时取景模式确定其厚度。
设置音量的下限和上限。然后继续对设定的视野进行图像采集。对于体积结构成像,通过依次获取每个 Z 平面的 2D 图像来获取整个大脑的 3D 图像。
对于单个Z平面的功能成像,在一定深度获取大脑神经元活动的时间序列图像。