Bereid om te beginnen het experiment en het materiaal voor dat nodig is voor het monteren en positioneren van zebravissen. Observeer onder een stereomicroscoop de verlamde zebravislarve om te controleren of zijn beweging is gestopt. Evalueer de gezondheid van de larven visueel door de hartslag te controleren.
Plaats vervolgens met behulp van een transferpipet een enkele larvale zebravis in de microcentrifugebuis van 1,5 milliliter met agarosegel. Giet de agarosegel in de petrischaal om een laag van één tot twee millimeter te maken. Breng de larve over van de microcentrifugebuis naar de petrischaal met behulp van een transferpipet.
Zorg ervoor dat je de larve in het midden van het gerecht plaatst. Plaats de larve met een tang in de gewenste richting, zodat de kop en staart plat zijn. Draai vervolgens met een tang de larve om beide ogen waterpas te zetten.
Nadat de uitlijning is voltooid, wacht u tot de agarosegel is gestold voordat u de petrischaal met eiwater vult. Plaats de schaal met de ingebedde larve op het microscoopstadium voor beeldacquisitie. Zet de microscoop aan en lokaliseer de larve in het midden van het gezichtsveld.
Stel met behulp van de beeldacquisitiesoftware de beeldparameters in. Als het beeld verzadigd is, vermindert u het laservermogen. Zoek vervolgens de hersenen van de larve door het stadium te verplaatsen en bepaal de dikte ervan met behulp van de Live View-modus in de software door de brandpuntsvlakken handmatig op en neer te veranderen.
Stel de onder- en bovengrenzen van het volume in. Ga vervolgens verder met de beeldacquisitie voor het ingestelde gezichtsveld. Voor volumetrische structurele beeldvorming verkrijgt u een 3D-beeld van de hele hersenen door achtereenvolgens 2D-beelden van elk Z-vlak te verkrijgen.
Voor functionele beeldvorming van een enkel Z-vlak verkrijgt u tijdreeksbeelden van de neuronale activiteit van de hersenen op een bepaalde diepte.