はじめに、ゼブラフィッシュの取り付けと位置決めに必要な実験と材料を準備します。実体顕微鏡で麻痺したゼブラフィッシュの幼虫を観察し、その動きが止まったことを確認します。幼虫の心拍をチェックして視覚的に健康状態を評価します。
次に、トランスファーピペットを使用して、単一の仔魚ゼブラフィッシュをアガロースゲルを含む1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブに入れます。アガロースゲルをペトリ皿に注ぎ、1〜2ミリメートルのコートを作ります。トランスファーピペットを使用して、幼虫をマイクロ遠心チューブからペトリ皿に移します。
幼虫を皿の中央に置くようにしてください。鉗子を使用して、頭と尾が平らになるように幼虫を希望の方向に配置します。次に、鉗子を使用して幼虫を回転させて両目を水平にします。
アライメントが完了したら、アガロースゲルが固まるまで待ってから、ペトリ皿に卵水を入れます。幼虫が埋め込まれた皿を顕微鏡ステージに置いて画像を取得します。顕微鏡の電源を入れ、視野の中心に幼虫を配置します。
画像取得ソフトウェアを使用して、イメージングパラメータを設定します。画像が飽和している場合は、レーザー出力を下げます。次に、ステージを動かして幼虫の脳を見つけ、ソフトウェアのライブビューモードを使用して、焦点面を手動で上下に変更して厚さを決定します。
音量の下限と上限を設定します。次に、設定した視野の画像取得に進みます。体積構造イメージングでは、各Z面の2D画像を順次取得することで、脳全体の3D画像を取得します。
単一のZ平面の機能イメージングのために、特定の深さにおける脳の神経活動の時系列画像を取得します。