Para comenzar, prepare el experimento y el material requerido para el montaje y posicionamiento del pez cebra. Bajo un microscopio estereoscópico, observe la larva de pez cebra paralizada para verificar que su movimiento se haya detenido. Evalúe la salud de la larva visualmente revisando sus latidos cardíacos.
Luego, usando una pipeta de transferencia, coloque una sola larva de pez cebra en el tubo de microcentrífuga de 1.5 mililitros que contiene gel de agarosa. Vierta el gel de agarosa en la placa de Petri para hacer una capa de uno a dos milímetros. Transfiera la larva del tubo de microcentrífuga a la placa de Petri utilizando una pipeta de transferencia.
Asegúrese de colocar la larva en el centro del plato. Usando fórceps, coloque la larva en la orientación deseada para que la cabeza y la cola estén planas. Luego, usando fórceps, gire la larva para nivelar ambos ojos.
Después de completar la alineación, espere hasta que el gel de agarosa se haya solidificado antes de llenar la placa de Petri con agua de huevo. Coloque el plato con la larva incrustada en la etapa del microscopio para la adquisición de imágenes. Encienda el microscopio y localice la larva en el centro del campo de visión.
Con el software de adquisición de imágenes, establezca los parámetros de imagen. Si la imagen está saturada, reduzca la potencia del láser. A continuación, encuentre el cerebro de la larva moviendo el escenario y determine su grosor utilizando el modo Live View en el software cambiando los planos focales manualmente hacia arriba y hacia abajo.
Establezca los límites inferior y superior del volumen. Luego continúe con la adquisición de imágenes para el campo de visión establecido. Para obtener imágenes estructurales volumétricas, adquiera una imagen 3D de todo el cerebro obteniendo imágenes 2D de cada plano Z secuencialmente.
Para obtener imágenes funcionales de un solo plano Z, adquiera imágenes de series temporales de la actividad neuronal del cerebro a cierta profundidad.