Name: Tail Vein Puncture Without Anesthesia
Uploaded: 2023-06-30T14:30:00
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tail vein puncture without anesthesia

Studio comparativo delle tecniche di raccolta del sangue nei ratti

Blood sampling is necessary for most animal studies, both in vivo and in vitro. In rats, as the frequency and amount of blood sampling can be significant, it is helpful to have different alternatives for collection. Various methods have been described in previous studies.
The most commonly used techniques are tail vein puncture and saphenous vein blood draw. Tail vein sampling is suitable for all rat strains. With proper training, the procedure is simple to perform and causes minimal distress to the animal1. Similarly, the saphenous vein blood draw, provided it is done properly, is also a quick and simple collection method. Neither method requires anesthesia, and both allow for repeated draws of small amounts of blood. However, the saphenous vein puncture usually yields a lower blood volume1 and requires the presence of two people to leave one hindlimb exposed for puncture2.
If large amounts of blood need to be collected from a single animal, cardiac puncture or puncture of the vena cava may be used (up to 10 mL of blood can be drawn from a 150 g rat with cardiac puncture2). These techniques require anesthesia and are terminal procedures. The animal must be euthanized after any of these two techniques2. The jugular stick is an alternative that can be used if large amounts of blood need to be collected in a study that has not yet reached its endpoint. However, this technique also requires significant technical skills to avoid harm to the animal; hence, its use should be limited3.
Other techniques, such as the subclavian vein blood draw, do not need the use of anesthetics before blood collection and allow for repeated sampling of small volumes of blood. However, restrained handling and appropriate needle incision are required for this technique. An improper operation may result in animal pain or even mortality, and the training for this method may be fastidious4. 
Other anecdotal procedures include the orbital puncture and the sublingual vein puncture, both of which require an anesthetic, and neither are recommended nor widely used. Though previous studies have shown faster blood collection by orbital puncture than by tail vein puncture, it was found that orbital puncture under diethyl-ether anesthesia was less well tolerated than the latter method (based on the animals' excitation scores and urine production)5. Moreover, this method is highly influenced by the skill of the person who performs the procedure and is mainly performed by experienced veterinarians. Comparably, the sublingual vein puncture is less distressing and is recommended for repeated blood sampling6. However, this technique presents severe adverse effects such as reduced food and water intake, which can lead to the animal's death7. 
This study describes two methods used in our laboratory for repeated blood sampling. Tail vein puncture can be performed on a conscious animal, and the tissue damage and adverse effects are minimal. The modification of this technique in this study includes stabilizing the tail with the index and middle finger, which allows a single operator to perform the blood collection. The dorsal penile vein puncture has already been described for simple intravenous injections. This technique is performed under anesthesia and allows for a reliable blood source in case of difficulties with other methods (e.g., during the immediate postoperative period, with a small animal, when performing perioperative blood draw under anesthesia). Similar to tail vein sampling, the injury at the puncture site will have a minor overall effect on the animal compared to the techniques mentioned above8. The aim of this methods paper is to offer inexperienced researchers simple and reliable blood sampling alternatives according to the context (e.g., for procedures done under anesthesia, for studies including male rats, for animals with thin tail veins).

Autore in primo piano: Metodi di raccolta del sangue dipendenti dal contesto nei ratti 

Puntura modificata della vena della coda e della vena del pene per il prelievo di sangue nel modello di ratto

The issue of repeated blood collection methods needs to be addressed since the majority of studies on rats require them. It's important to take into account that a sampling method can be very efficient in a certain context, but become unsuitable for another study. This protocol aims to offer simple and reliable blood sampling alternatives to researchers.Both methods can be done by a single operator and require no extensive prior training, which allows for standardized procedure. When an animal is under anesthesia, the effect of isoflurane can lead to vessel spasm and make the tail vein puncture unsuitable for blood collection. Our protocol offers an alternative in this situation, the penile vein puncture, which presents a better success rate and yields significantly more amounts of blood in less time.

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Tail Vein Puncture Without Anesthesia  

Puntura della vena caudale senza anestesia

Per iniziare, fissare il topo in un cono di contenimento di plastica, racchiudere la grande estremità del cono attorno alla base della coda. Assicurarsi che l'animale sia a suo agio e che la respirazione sia illimitata durante tutta la procedura. Immergere la coda in acqua tiepida per circa un minuto per dilatare la vena e asciugare la coda con un tovagliolo di carta.Nel sistema di immobilizzazione, posizionare l'animale rivolto verso il basso con la coda sdraiata su una piastra elettrica. Per selezionare la vena caudale appropriata per il campionamento, ruotare l'intero animale sul lato destro o sinistro. Utilizzare il terzo terminale della coda per la perforazione dei vasi sanguigni poiché i vasi diventano più superficiali in questa zona.Pulire la coda con salviette a etanolo al 70% sul sito di foratura e posizionarla sul bordo del termoforo, creando un angolo nel terzo terminale della coda. Questo porta la vena in superficie e crea più spazio per prelevare il campione. Per il prelievo di sangue, spostare lo stantuffo avanti e indietro nella siringa più volte per attenuare il prelievo e quindi tirare lo stantuffo per creare una pressione negativa nella siringa.Fissare la coda piatta sul termoforo usando l'indice e il medio non dominanti. Posizionare il dito medio prossimalmente e l'indice distalmente con il sito di puntura tra queste due dita. Far scorrere la siringa da insulina contro l'indice con la cruna dell'ago rivolta verso l'alto fino a quando non viene inserita nella vena.Questo crea un angolo di 35 gradi tra l'ago e la coda. Una volta che l'ago è entrato nella vena, il sangue fluirà nella siringa. Prelevare lentamente lo stantuffo della siringa a una velocità costante per raccogliere il volume desiderato.Rimuovere la siringa dalla coda e lasciare che si formi una goccia di sangue sul lato della puntura della coda. Aspirare questo sangue per raccogliere qualche microlitro in più di sangue, in caso di una procedura non sterile. Applicare pressione sul sito di puntura per fermare l'emorragia e pulire l'area con una nuova salvietta imbevuta di alcool.Dopo aver rimosso il topo dal cono, riportarlo nella sua gabbia. Le percentuali di successo con i metodi di puntura della vena della coda sono state confrontate con il tasso di successo del metodo di puntura della vena del pene in anestesia. È interessante notare che, sotto anestesia, la vena della coda è diventata molto inaffidabile e ha avuto un tasso di successo di solo il 25% Le percentuali di successo hanno mostrato risultati quasi simili per la puntura della vena della coda nei ratti coscienti e la puntura della vena del pene in anestesia.Il prelievo di sangue è stato eseguito in meno di sei minuti nella puntura della vena della coda senza anestesia e il metodo di puntura della vena del pene in anestesia, mentre il metodo di puntura della vena della coda in anestesia ha richiesto più di otto minuti a causa di molteplici fallimenti.

Research

JoVE Journal

Medicine

Tail Vein Puncture Without Anesthesia

Modified Tail Vein and Penile Vein Puncture for Blood Sampling in the Rat Model

Blood samples are required in most experimental animal designs to assess various hematological parameters. This paper presents two procedures for blood ...