Om het blaasjesmembraan te kleuren, voegt u de fluorescerende lipidekleurstof FM4-64 toe aan de gezuiverde blaasjes in een eindconcentratie van twee micromolaire en incubeert u gedurende 10 minuten voordat u beeldvorming maakt. Na het isoleren van de met eiwitten gevulde blaasjes uit de Escherichia coli-cultuur, pipetteer de gezuiverde blaasjes op een minder dan een millimeter dun cirkelvormig 2% LB agarose-kussen dat zich heeft kunnen vormen en op een schone glazen dia is gezet. Zodra de vloeistof is opgedroogd, plaatst u een afdekplaat van 50 millimeter bij 25 millimeter over de blaasjes op de pad.
Houd de afdekplaat op zijn plaats met afstandhouders en plakband. Monteer vervolgens de dia op een omgekeerde microscoop met behulp van een olie-onderdompelingsobjectief en laat het monster twee tot drie minuten bezinken en de temperatuur in evenwicht brengen. Gebruik voor afbeeldingen met één frame drie afbeeldingsgemiddelden om hardwareafhankelijke willekeurige achtergrondruis te verminderen.
Voor time-lapse-beeldvorming moet u drie tot vijf minuten tussen afzonderlijke frames laten. Widefield fluorescentie microscopie beeldvorming toonde de gezuiverde amniongroene bevattende blaasjes. De lipofiele fluorescerende kleurstof, FM4-64, bevestigde de aanwezigheid van blaasjesmembranen.
Gestructureerde verlichtingsmicroscopie van de levende bacteriële cellen die het binnenmembraaneiwit, CydB, tot expressie brengen, gefuseerd tot amniongroen, en VNp6-mCherry2 toonde blaasjesproductie en ladinginbrenging.